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Milieux De Culture Déshydratés

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KANAMYCINE ESCULINE AZOTURE (GELOSE)

Milieu sélectif pour l’isolement des streptocoques fécaux dans les aliments (A utiliser avec le supplément SR0092).

GELOSE DE BASE

CODE : CM0591

COMPOSITION

(grammes/litre)
Tryptone 20,0
Extrait de levure 5,0
Chlorure de sodium 5,0
Citrate de sodium 1,0
Esculine 1,0
Citrate de fer ammoniacal 0,5
Azoture de sodium 0,15
Agar n° 1 10,0
pH 7,0 ± 0,2  

500 grammes permettent de préparer 11,7 litres de milieu.

SUPPLEMENT  KANAMYCINE SULFATE

CODE : SR0092

COMPOSITION

(par flacon)
Kanamycine (sulfate) 0,01 g

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu.


PREPARATION
Reconstituer le supplément avec 2 ml d’eau distillée stérile et agiter doucement jusqu’à dissolution complète.
Verser 21,3 g de poudre dans 500 ml d’eau distillée. Ajouter un flacon de supplément reconstitué. Porter à ébullition. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave et répartir.


DESCRIPTION
La kanamycine est présentée sous forme de supplément lyophilisé (SR0092) dans un flacon contenant la quantité nécessaire pour 500 ml de milieu.
Ce milieu contient des agents inhibiteurs : kanamycine et azoture de sodium, ainsi qu’un indicateur permettant de visualiser la pousse des streptocoques qui hydrolysent l’esculine. Ceci se manifeste par un noircissement du milieu autour des colonies dû à la formation d’un complexe noir dérivé des produits de l’hydrolyse de l’esculine et du fer ferreux.
Le milieu CM0591B a été élaboré par Mossel et coll1,2 pour rechercher les streptocoques du groupe D dans les aliments. Ceux-ci donnent des colonies rondes, blanches ou grises, de 2 mm de diamètre environ, entourées d’un halo noir d’au moins 1 cm de diamètre.
Incuber en aérobiose à 37°C ou 42°C ± 0,3°C pendant 18 à 24 heures. Une température plus élevée augmente la sélectivité du milieu.
Ce milieu a été utilisé par Mossel et coll.3 dans la technique des lames gélosées pour le contrôle bactériologique des aliments.


UTILISATION
Méthode d’ensemencement des échantillons : étaler 0,1 ml de l’échantillon dilué sur toute la surface d’une boîte de pétri préalablement séchée.
Incuber à 37°C pendant 24 à 72 heures.
Considérer comme résultat positif pour les streptocoques du groupe D toute colonie entourée d’un halo noir.
Des tests de confirmation peuvent être réalisés : recherche de la catalase, utilisation du glucose, pousse à 45° ± 1°C, cocci Gram + formant des chaînettes.


CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Enterococcus faecium ATCC® 19434
Streptococcus bovis ATCC® 27960


Contrôle négatif :
Bacillus subtilis ATCC® 6633
Escherichia coli ATCC® 25922


PRECAUTIONS
Respecter les précautions d’usage concernant l’azoture de sodium, lors de la fabrication du milieu. Il n’y a pas de milieu universel pour l’isolement de toutes les souches de streptocoques fécaux.4 Il est nécessaire de confirmer l’identification des colonies isolées par des tests complémentaires.


BIBLIOGRAPHIE
1 Mossel D.A.A., Bijker P.G.H. and Eelderink I. (1978) Arch. Lebensmittel-hyg., 29. 121-127.
2 Mossel D.A.A., Bijker P.G.H. and Eelderink I. and van Spreekens K.A. (1978) In: Streptococci. Eds. Skinner F.A. & Quesnel L.B. SAB Symposium. Series No. 7. Academic Press.London.
3 Mossel D.A.A., Eelderink I., de Vor H. and Keizer E.D. (1976) Lab. Practice. 25. 393-395.
4 Reuter G. (1985) Inter. J. Food Microbiol., 2. 103-114

 
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