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CODE : CM0259

Milieu sélectif pour la recherche et l’isolement des streptocoques et staphylocoques dans les selles, les eaux usées et autres produits. Enrichi avec du sang, ce milieu peut être employé pour la détection simultanée de réactions hémolytiques.

500 grammes permettent de préparer 16,6 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 30,2 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Ajouter 5 % de sang stérile au milieu préalablement refroidi à 45–50°C.

UTILISATION
C’est un milieu sélectif pour la recherche et l’isolement des streptocoques dans les selles, les eaux usées et autres produits renfermant une flore mixte. La gélose Sang-Azoture est semblable au milieu utilisé par Edwards ¹pour l’isolement des streptocoques responsables de mammites. L’azoture de sodium a un effet bactériostatique sur la plupart des microorganismes Gram –, mais permet la croissance des microorganismes Gram +, comme les streptocoques et quelques souches de staphylocoques. Les Proteus sont un peu plus résistants que les autres entérobactéries mais l’envahissement est inhibé (Snyder et Lichstein ², Lichstein et Snyder ³).
A la concentration et au pH indiqués ci-dessus, l’azoture de sodium n’exerce aucun effet notable sur l’hémolyse si bien que le milieu, enrichi en sang, peut être utilisé pour une détection simultanée de réactions hémolytiques.
Le milieu Sang–Azoture est recommandé par l’American Public Health Association ⁴ pour l’isolement des streptocoques dans les fromages.
Les boîtes inoculées avec des dilutions de fromage émulsionnées sont incubées à 37°C et les colonies suspectes sont repiquées pour identification.
Il existe des variantes de ce milieu recommandées pour différents usages :
1 Packer ⁵ préconise une concentration d’azoture de sodium de 0,9 g par litre et l’addition de 0,002 g de cristal violet par litre. Le pH est également ajusté à 6,8 ± 0,1. On obtient ainsi un milieu plus sélectif pour la recherche des streptocoques fécaux dans les aliments.⁶
2 Packer⁵ et Wood ⁷ ont repris la formule ci-dessus avec 5 % de sang en augmentant la concentration du cristal violet à 0,01 g par litre pour l’isolement d’Erysipelothrix rhusiopathiae et Streptococcus pneumoniae.
3 Dale ⁸and Bohm ⁹ conseillent d’ajouter du phénol (1,0 à 2,5 g par litre) à la formule de Packer pour isoler E. rhusiopathiae.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Enterococcus faecalis ATCC® 29212
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
Contrôle négatif :
Proteus vulgaris ATCC® 13315
Escherichia coli ATCC® 25922

PRECAUTIONS
Les Proteus et les Escherichia ne sont pas inhibés avec la formule d’Edwards.
Utiliser toujours un inoculum léger pour obtenir de meilleurs résultats sélectifs.
Une incubation anaérobie favorisera l’hémolyse.
L’hémolyse n’est pas caractéristique sur le milieu modifié de Packer. Streptococcus lactis ne poussera pas sur la formule modifiée de Packer avec 5 % de sang de mouton.
Lire le paragraphe 2.3.8 sur les risques et précautions à prendre avec les milieux contenant de l’azoture.

BIBLIOGRAPHIE
1 Edwards S.J.(1933), J. Comp. Path. Therap., 46 (4), 211-217.
2 Snyder M.L. and Lichstein H.C. (1940), J. Infect. Dis., 67(2), 113-115.
3 Lichstein H.C. and Snyder M.L. (1941), J. Bact., 42 (5), 653-664.
4 American Public Health Association (1978), Standard Methods for the Examination of Dairy Products, 14th Edn. APHA Inc. New York.
5 Packer R.A. (1943), J. Bact., 46, 343-349.
6 Mossel D.A.A., Diepen H.M.J. van and de Bruin A.S. (1957), J. Appl. Bact., 20 (2), 265-272.
7 Wood R.L. (1965) Amer. J. Vet. Res., 26, 1303-1308.
8 Dale C.N. (1940), J. Bact., 40, 228-231.
9 Bohm K.H. (1971), Zbl. Bakt. I. Orig., 218, 330-334.