Oxoid - Product Detail

COMPOSITION DU COFFRET
Coffret de 60 tests
ID0581 Cartes test : 1 sachet contient 20 cartes et un dessicateur. Il y a 3 tests par carte, 60 tests au total. Chaque carte test est imprégnée de 7 AMC.
ID0582 Solution de révélation - 1 flacon comptegouttes contenant 7 ml d’acide chlorydrique 1M et de diméthylaminocinna-maldehyde.
ID0583 Tampon - 1 flacon compte-gouttes contenant 7 ml de PBS. Clip en plastique pour fermer le sachet après ouverture.
Fiche technique.

PRINCIPE
L’activité Pyrase permet de différencier les entérocoques des streptocoques, en particulier des streptocoques du groupe D (anciennement streptocoques fécaux)^1,2. Ce test offre une alternative plus rapide que la culture.
Cette activité enzymatique permet aussi de différencier Salmonella sp de Citrobacter sp et des autres entérobactéries ^3,7.
Le test PYRase est traditionnellement basé sur l’utilisation du peptide ß-naphthylamide. Celui-ci est un carcinogène puissant ⁴. Oxoid a développé un nouveau système utilisant un substrat non carcinogène.
Le système d’identification OBIS-PYR Oxoid utilise des cartes test imprégnées d’acide L-pyroglutamique-
7 amino-4 méthyl coumarine (7 AMC) et de diméthylaminocinnamaldehyde pour la détection de l’activité PYRase. L’hydrolyse enzymatique de ce substrat par les entérocoques, les streptocoques Aet les Citrobacter spp donne une coloration rouge, après addition de la solution de révélation ⁵.

MODE D’EMPLOI

A. Recueil et préparation de l’échantillon
Pour plus de détails concernant le recueil et le traitement des échantillons, les procédures standards peuvent être consultées ⁶.
Pour identifier les entérocoques ou les streptocoques
A: Les meilleurs résultats sont obtenus à partir d’une primoculture ou d’une subculture de 18 heures sur un milieu non sélectif tel qu’une gélose au sang.
Les colonies testées doivent être des cocci Gram positif catalase négative. En cas de pousse insuffisante, une subculture doit être pratiquée.
Pour différencier Citrobacter sp de Salmonella sp et des Enterobacteriaceae :
Des colonies isolées sur milieu sélectif ou non sélectif peuvent être utilisées (par exemple : XLD, MLCB, Mac Conkey, Désoxycholate Citrate, SS, Vert Brillant ou Hektoen).
Les colonies doivent être des bacilles Gram négatif, Oxydase négative et Uréase négative ⁶.

B. Mode opératoire
1. Déposer une goutte de tampon sur la zone test pour humidifier.
2. Etaler une colonie suspecte (de diamètre ???0,5 mm) sur la zone test (de manière à obtenir un dépôt visible).
3. Incuber la carte test à température ambiante (15-30°C) pendant 5 minutes.
4. Déposer une goutte de solution de révélation sur la zone test. L’apparition d’une coloration pourpre sur et autour des colonies en 20 secondes confirme l’activité PYRase.

C. Lecture et interprétation des résultats
Résultat positif
Un résultat positif se traduit par l’apparition d’une coloration pourpre dans la zone de dépôt de la colonie, dans les 20 secondes qui suivent l’ajout du réactif de révélation.
Résultat négatif
Un résultat négatif se traduit par l’absence de coloration dans les 20 secondes qui suivent l’ajout du réactif de révélation.

D. Tableau d’interprétation

RESULTATS ATTENDUS
Germe	Réaction avec :
Germe	Groupe	OBIS PYR
Streptococcus pyogenes	A	+
Streptococcus agalactiae	B	–
Streptococcus C	C	–
Streptococcus bovis	D	–
Enterococcus faecalis	D	+
Enterococcus faecium	D	+
Streptococcus F	F	–
Streptococcus G	G	–
Citrobacter	–	+
Salmonellae	–	–
Escherichia coli	–	–

CONSERVATION
Conserver le coffret à 2-25°C jusqu’à la date de péremption.

BIBLIOGRAPHIE
1. Ellner, P.D., Williams, D.A., Hosmer, M.E. and Cohenford, M. (1985). Preliminary Evaluation of a rapid colorimetric method for the presumptive identification of Group Astreptococci and enterococci. J. Clin. Microbiol. 22. 880-881.
2. Facklam, R.R., Padula, J.F., Thacker, L.G., Wortham, E.C. and Sconyers, B.J. (1974). Presumptive identification of Group A, B and D streptococci. Appl. Microbiol. 27. 107-109.
3. Chagla, A.H., Borczyk, A.A., Aldom, J.E., Dalla Rosa, S. and Cole, D.D. (1993). Evaluation of the L-Pyrollidonyl-BNaphthylamide hydrolysis test for differenciation of members of the families Enterobacteriaceae and Vibrionaceae. J. Clin. Microbiol. 31. 1946-1948.
4. Bascomb, S., Manafi, M., (1988) Use of enzyme tests in the characterisation and identification of aerobic and facultatively anaerobic Gram Positive cocci. Clinical Microbiology Reviews.11. 318-340.
5. Data on file at Oxoid.
6. Faklam, R.R and Washing, J.A. (1991). Streptococci and Aerococci. p. 238-258. In Lunette, I.H. Bales, A., Hausler (Jr), W.J. and Shadomy, H.J. (ed). Manual of Clinical Microbiology, 5th edition. Amer. Soc. for Microb., Washington, D.C.
7. Bennett, A.R., MacPhee, S., Betts, R and Post, D. Use of the enzyme pyrrolidonyl peptidase (Oxoid PYR test) to distinguish Citrobacter from Salmonella isolated from foods. Letters in Applied Microbiology. (In press).