CODE : CM0271

Gélose de base au sang aux propriétés nutritives accrues pour la culture de germes exigeants et autres germes.

500 grammes permettent de préparer 12,7 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 39,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Mélanger et stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 45–50°C et ajouter 7 % de sang stérile. Mélanger doucement par rotation et répartir.

DESCRIPTION
La gélose de base au sang n°2 permet une récupération maximum des germes exigeants sans interférer sur leurs réactions hémolytiques.
Par comparaison avec d’autres géloses au sang, la gélose de base au sang n°2 améliore la croissance de nombreux germes exigeants particulièrement les streptocoques et les pneumocoques qui se développent rapidement et abondamment.
Brucella :
Pour obtenir un milieu sélectif, ajouter le supplément sélectif pour Brucella (SR0209) à 500 ml de gélose au sang n°2 stérilisée et fondue, contenant 5 à 10 % (vol/vol) de sérum de cheval décomplémenté et 1 % (pds/vol) de glucose.^2,3
Campylobacter :
Pour préparer un milieu sélectif, ajouter le supplément de Skirrow (SR0069)⁴ ou le supplément de Butzler (SR0085)^5,6 ou le supplément de Blaser-Wang (SR0098)^7,8,9 à 500 ml de gélose au sang n°2 stérilisée et fondue contenant le supplément de croissance pour campylobacter (SR0084)^10,11 et 5–7 % (vol/vol) de sang de cheval.
Pour l’isolement primaire d’Haemophilus sp. à partir d’échantillons contenant une flore mixte, utiliser la gélose de base au sang n°2 additionnée de sang de cheval défibriné. On peut même obtenir de meilleurs résultats en utilisant des boîtes de gélose au sang de cheval dont la moitié est recouverte de 2 gouttes de saponine à 10 %.⁹
Quand les réactions hémolytiques ne sont pas importantes, avec des cultures pures, par exemple, la base peut être utilisée pour préparer la “gélose chocolat”. Pour cela, ajouter à la base à 80°C, 10 % de sang de cheval défibriné et maintenir cette température pendant 5 à 10 minutes en agitant fréquemment. Refroidir à 50°C, bien mélanger et répartir.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver les boîtes coulées à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Gélose au sang
Contrôle positif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
Sreptococcus pyogenes ATCC® 19615
Haemophilus influenzae ATCC® 35056
Gélose pour Brucella
Contrôle positif :
Brucella abortus ATCC® 4315
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922
Gélose pour Campylobacter
Contrôle positif :
Campylobacter jejuni ATCC® 29428
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922

PRECAUTIONS
Les cultures de Brucella sont très infectantes et doivent être manipulées avec les précautions d’usage. Incuber sous 5 à 10 % de CO2 pendant 24–48 heures.
Les Campylobacter sp. poussent mieux à 42°C (sauf C. fetus) en microaérophilie (sachet générateur pour campylobacter CN0025, CN0035 ou CN0020).

BIBLIOGRAPHIE
1 Farrell I.D. and Robinson L. (1972), J. Appl. Bact., 35, 625-630.
2 Hunter D. and Kearns M. (1977), Brit. Vet. J., 133, 486-489.
3 Skirrow M.B. (1977), B M J (ii), 9-11.
4 Blaser M.J., Hardesty K.L., Powers B. and Wang W.L.L. (1980), J. Clin. Microbiol., 11, 309-313.
5 Blaser M.J., Berkowitz I.D., La Force F.M., Cravens J., Reller L.B. and Wang U.L.L. (1979), Ann. Int. Med., 91, 179-185.
6 Blazer M.J., Cravens J., Powers B.W., La Force F.M. and Wang W.L.L. (1979), Amer. J. Med., 67, 715-718.
7 George H.A., Hoffman P.S. and Krieg N.R. (1978), J. Clin. Microbiol., 8, 36-41.
8 Hoffman P.S., George H.A., Krieg N.R and Smibert R.M. (1979), Can. J. Microbiol., 25, 8-16.
9 Waterworth, Pamela M. (1955), Brit. J. Exp. Path., 36, 186-194.