Part of Thermo Fisher Scientific
Organisms this product works with:
Other products used in the isolation of Enterococcus:
CODE : CM0485
Milieu sélectif contenant du glucose pour l’isolement et la numération des entérobactéries dans les produits alimentaires.
COMPOSITION |
(grammes/litre) |
Extrait de levure | 3,0 |
Peptone | 7,0 |
Chlorure de sodium | 5,0 |
Sels biliaires n°3 |
1,5 |
Glucose | 10,0 |
Rouge neutre | 0,03 |
Cristal violet | 0,002 |
Agar | 12,0 |
pH 7,4 ± 0,2 |
500 grammes permettent de préparer 13 litres de milieu.
PREPARATION
Verser 38,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition
jusqu’à dissolution complète. Ne pas autoclaver. Bien mélanger
et répartir.
DESCRIPTION
Les résultats des tests que l’on peut appliquer à l’eau
pour isoler les coliformes comme indicateurs possibles d’une contamination
fécale, ont beaucoup moins de signification lorsqu’ils sont appliqués
aux produits alimentaires crus. Pour l’examen des denrées alimentaires,
il est recommandé 1,2 d’isoler un groupe plus défini de
microorganismes, les entérobactéries, qui fermentent le lactose
et produisent de l’acide et/ou du gaz. En plus des coliformes, ce groupe
inclut les Salmonella et les Shigella qui ne fermentent pas le lactose, ainsi
que Escherichia coli entérotoxinogène. Il inclut également
des microorganismes tels que Klebsiella et Citrobacter qui sont plus résistants à la
chaleur que les coliformes et sont par conséquent de meilleurs indicateurs
de l’échec des méthodes qui utilisent une chaleur minimale.
Mossel
et coll. 3 qui ont étudié les difficultés à compter
le nombre total d’entérobactéries dans les denrées
alimentaires, ont montré que l’addition de glucose améliore
la performance d’un milieu existant pour l’isolement des coliformes.
Ils ont ajouté 10 g par litre de glucose à une gélose
biliée au cristal violet et au rouge neutre (gélose VRBL, CM0107)
et ont appelé la formule modifiée : gélose de Mac Conkey
glucosée.
Des travaux supplémentaires de Mossel et coll.4,5 ont montré que
le lactose pouvait être enlevé, aboutissant à la composition
de la gélose VRBG (CM0485). L’addition de lactose ne permettrait
pas une identification plus précise.
Les milieux contenant des sels biliaires
sont toxiques pour les entérobactéries,
même pour les germes qui n’ont pas été stressés.6,7,8,9,10,11
Des
différences considérables entre six préparations
de gélose VRBL 4,5 commercialisées ont été observées
en ce qui concerne leurs performances pour les entérobactéries.12
Les composants du milieu Oxoid ont été testés conjointement
avec Mossel qui a rédigé les spécifications suivantes
:
1 Les milieux retenus doivent être clairs et produire des colonies de
taille satisfaisante. La numération des colonies typiques d’entérobactéries
doit être reproductible.
2 Testés quant à leur toxicité intrinsèque par
une méthode anaérobie 13 en utilisant une souche de Yersinia
enterocolitica (Sérotype 03) comme indicateur, les milieux doivent donner une pousse,
une formation d’acide et, si nécessaire, une formation de gaz
suffisantes.
3 Les milieux doivent confirmer le taux de colonies typiques, c’est-à-dire
le nombre de colonies identifiées comme entérobactéries
divisé par le nombre de colonies testées.
La gélose VRBG (CM0485) a été mise au point pour répondre à tous
ces critères et est conforme aux recommandations de l’ISO.14
UTILISATION
Préparer des séries de dilutions des échantillons de
sorte qu’au moins une produise de 100 à 200 colonies pour une
aliquote de 1 ml. Transférer des aliquotes de 1 ml de chaque dilution
dans des boîtes de Pétri de 9 cm en utilisant 2 boîtes pour
chaque dilution. Ajouter 15 ml de milieu refroidi à 47°C. Mélanger
par rotation. Après solidification du milieu, recouvrir avec 10 ml du
même milieu et laisser solidifier. Retourner les boîtes et incuber à une
température supérieure à 42°C pendant 18 heures, à 32°C
pendant 24 à 48 heures ou à 4°C pendant 10 jours selon les
groupes d’entérobactéries à isoler.15
La gélose en double couche assure des conditions anaérobies
qui suppriment la pousse des bactéries Gram – non fermentantes.
Elle facilite également la fermentation du glucose qui favorise la formation
de colonies pourpres clairement visibles, entourées d’un halo
pourpre.
LECTURE
Colonies rondes, de couleur pourpre, de 1 à 2 mm de diamètre,
entourées d’un halo pourpre. Des tests supplémentaires
doivent être faits pour confirmer l’identité de ces colonies.
CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la
date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C
et l’utiliser rapidement.
CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Escherichia coli ATCC® 25922
Contrôle négatif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
PRECAUTIONS
Ce milieu n’est pas totalement spécifique des entérobactéries,
d’autres microorganismes peuvent pousser tels que les Aeromonas et Yersinia
sp.
La sélectivité du milieu diminue après 24 heures d’incubation
et les microorganismes précédemment inhibés peuvent pousser.
Le
milieu pour la technique en boîtes coulées doit être
préparé extemporanément, refroidi à 47°C et
utilisé dans les 3 heures.
BIBLIOGRAPHIE
1 WHO Technical Report Series N.598 (1976) Geneva, p. 51.
2 Mossel D.A.A. (1958)
Zbl. Bakt. I. Ref. 166, 421-432.
3 Mossel D.A.A., Mengerink W.H.J. and Scholts
H.H. (1962) J. Bacteriol., 84, 381.
4 Mossel D.A.A., Eelderink I., Koopmans
M. and van Rossem F. (1978) Lab. Practice 27, N°12, 1049-1050.
5 Mossel D.A.A.
, Eelderink I., Koopmans M. and van Rossem F. (1979) J. Food Protect., 42, 470-475.
6
Mossel D.A.A. (1978) Food Technol. Austral., 30, 212-219.
7 Kroninger D.L. and
Banwart G.J. (1978) J. Food Sci., 43, 1328-1329.
8 Bridson E.Y. (1978-79) in “Van
Monster tot Resultaat” Nederland Society for Microbiology. Wageningen,pp.
58-67.
9 Burman N.P. (1955) Proc. Soc. Water Treatm. Exam., 4, 10-20.
10 Mossel D.A.A.
and Harrewijn G.A. (1972) Alimenta, 11, 29-30.
11 Mossel D.A.A., Harrewijn G.A.
and Nesselrooy-van Zadelhoff C.F.M. (1974) Health Labor. Sci., 11, 260-267.
12
Mossel D.A.A. (1971) Miscell. Papers Agricult. University Wageningen The
Netherlands,9, 29-39.
13 Mossel D.A.A., Eelderink I. and Sutherland J.P. (1977) Zbl. Bakt. I.,
Orig.,
A238, 66-79.
14 International Organization for Standardization : Meat and meat products-detection
and enumeration of Enterobacteriaceae. ISO/DIS 5552.1977.
15 Mossel D.A.A., van
der Zee H., Hardon A.P. and van Netten P. (1986) J. Appl. Bact., 60, 289-295.