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CODE : CM0097

Milieu solide défini pour la culture des champignons et bactéries utilisant le nitrate de sodium comme seule source d’azote.

L’acidité de ce milieu peut être augmentée pour cultiver des microorganismes acidophiles comme les levures.

500 grammes permettent de préparer 11 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 45,4 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Bien mélanger et répartir. Si nécessaire, ajuster le pH à 3,5 avec 10 ml d’acide lactique à 10 % (SR0021K) par litre de milieu, après stérilisation.

DESCRIPTION
La gélose de Czapek-Dox modifiée contenant du nitrate de sodium comme seule source d’azote, est un des milieux les plus utilisés pour la culture des champignons.
Dans le milieu OXOID, le glycérophosphate de magnésium et le sulfate de potassium remplacent le sulfate de magnésium et le phosphate de potassium du milieu original.
Cette modification empêche la précipitation du phosphate de magnésium. Ce milieu est également un substrat très satisfaisant pour la production de chlamydospores par Candida albicans.¹
Dawson¹ a utilisé la gélose de Czapek-Dox pour identifier Candida albicans par la formation de chlamydospores en culture primaire à partir de prélèvements buccaux et vaginaux. L’identification est habituellement possible en 24 heures. Le milieu OXOID a permis une bonne production de chlamydospores contrairement au milieu original.
Après 24 heures d’incubation, sur 27 souches de Candida albicans, 23 souches formaient des chlamydospores sur gélose de Czapek-Dox OXOID, 21 sur gélose au riz, 10 sur gélose au maïs OXOID et 10 sur gélose au maïs préparée au laboratoire. Après 8 heures, 25 souches ont formé des chlamydospores sur le milieu OXOID et la gélose au riz, 24 sur la gélose au maïs OXOID et 20 sur le milieu du laboratoire. Dawson en a conclu que le milieu de Czapek-Dox OXOID et la gélose au riz étaient les plus satisfaisants. Aucune des 14 souches de levures non identifiées n’a formé de chlamydospores sur ces milieux.
Pour utiliser la gélose de Czapek-Dox, Smith² recommande de suivre les études taxonomiques suivantes : de Thom et Church³ pour Aspergillus ; de Thom⁴ et de Raper et Thom⁵ pour Penicillium ; de Waksman⁶ pour les actinomycètes.

UTILISATION (Méthode)
Pour éviter une condensation excessive, refroidir le milieu fondu à 50°C avant de répartir environ 12 ml par boîte de Pétri de 90 mm. Conserver les boîtes retournées et ensemencer de même à l’aiguille ou à l’oese pour éviter la dispersion des spores fongiques à la surface du milieu. Selon les espèces à cultiver, le temps et la température d’incubation varient considérablement : généralement une à deux semaines à 25°C. La plupart des Penicillium sp. poussent à une température optimale de 20 à 25°C, tandis que de nombreux Aspergillus sp. se développent mieux à 30°C environ. Cependant, divers champignons se développent à des températures variables ; Aspergillus fumigatus pousse bien à 50°C (Smith2) et Cladosporium herbarum se développera sur la viande à – 6°C^7,8.

IDENTIFICATION DE CANDIDA ALBICANS1
1 A l’aide d’une aiguille (préalablement flambée, refroidie, puis frottée contre l’écouvillon), couper la gélose jusqu’au fond de la boîte. Avec la même aiguille, soulever le milieu d’un côté de la coupure pour que l’inoculum diffuse entre la gélose et le fond de la boîte.
2 Incuber 24 heures à 28°C.
3 Observer les chlamydospores au microscope à faible objectif à travers le fond de la boîte, ou enlever le couvercle et examiner à travers le milieu.
4 Si aucune chlamydospore n’est observée, incuber 24 heures de plus et examiner de nouveau.

CONSERVATION
CONTROLE DE QUALITE
voir bouillon de Czapek-Dox

BIBLIOGRAPHIE
1 Dawson, Christine O. (1962) Saboutaudia, 1, 214-219.
2 Smith G. (1960) ‘An Introduction to Industrial Mycology’5th ed., Edward Arnold Ltd., London.
3 Thom C. and Church M.B. (1926) ‘The Aspergilli’ Williams and Wilkins Co., Baltimore.
4 Thom C. (1930) ‘The penicillia’ Williams and Wilkins Co., Baltimore.
5 Raper K.B. and Thom C. (1949) ‘Manual of the Penicillia’ Williams and Wilkins Co., Baltimore.
6 Wakesman S.A. (1931) ‘Principles of Soil Microbiology’ Bailliere Tindall and Cox, London.
7 Brooks F.T. and Kidd M.N. (1921) Specia. Report No. 6, Food Invest Board, DSIR, London.
8 Brooks F.T. and Handsford C.G. (1922) Trans Brit. Mycol.Soc., 8, 113-142.