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Milieu sélectif pour l’isolement de Campylobacter jejuni et Campylobacter coli à incuber à 42°C.

GELOSE DE BASE (KARMALI)

CODE : CM0935

500 grammes permettent de préparer 11,6 litres de milieu.

SUPPLEMENT SELECTIF

CODE : SR0167

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu.

SUPPLEMENT SELECTIF MODIFIE

CODE : SR0205

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu.

PREPARATION
Verser 21,5 g de poudre dans 500 ml d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C et ajouter stérilement un flacon de supplément SR0167 ou SR0205 préalablement reconstitué avec 2 ml d’un mélange éthanol/eau à parties égales. Bien mélanger et répartir.

DESCRIPTION
Le milieu de Karmali, basé sur la formule décrite par Karmali et coll.¹, est recommandé pour l’isolement de C. jejuni et C. coli dans les prélévements cliniques.
Il est préparé à partir de la gélose de base Karmali (CM0935) additionnée du supplément sélectif Karmali (SR0167). Le milieu d’origine (Campylobacter Blood Free) de la gamme Oxoid contient du pyruvate de sodium dans la gélose de base. Dans le cas du milieu de Karmali, cet ingrédient est incorporé dans le supplément sélectif. Le milieu initial contient également du désoxycholate de sodium pour inhiber la croissance des germes Gram +. Dans le milieu de Karmali, l’inhibition des Gram + est réalisée par l’addition de vancomycine.
De plus, la présence d’hémine dans le supplément sélectif supprime la nécessité du sulfate ferreux inclus dans le milieu initial.
La céfopérazone et le cycloheximide sont associés pour inhiber la pousse des microorganismes contaminants.

UTILISATION
1 Préparer les boîtes de milieu sélectif pour Campylobacter de Karmali comme décrit ci-dessus.
2 Diluer l’échantillon au 1/10 : pour cela, émulsionner environ 0,5 g de l’échantillon à tester dans 5 ml d’eau peptonée stérile à 0,1%.
3 A l’aide d’un écouvillon à embout coton, ensemencer sur milieu sélectif de façon à obtenir des colonies isolées.
4 Incuber 48 heures à 42°C en atmosphère contenant 5–6 % d’02, 10 % de CO₂ et 84–85 % d’azote. Pour cela, il est possible d’utiliser les sachets générateur pour Campylobacter(CN0025A, CN0035A ou CN0020C).
5 Observer les boîtes et confirmer la présence de
C. jejuni ou de C. coli. Skirrow et Benjamin² ont publié un schéma simplifié pour différencier les diverses espèces de Campylobacter.

LECTURE
Les souches de C. jejuni donnent des colonies grises, humides, plates et qui ont tendance à s’étaler après 42 heures d’incubation à 42°C.
Si on observe les boîtes après 24 heures d’incubation, il faut les lire rapidement et les replacer immédiatement en atmosphère appauvrie en oxygène afin de préserver les souches les plus sensibles à l’oxygène.
A 42°C, la sélectivité est améliorée et la pousse plus rapide, mais les souches non-thermophiles ne se développent pas (ex : C. fetus subsp. fetus).
Les colonies ont tendance à être confluentes lorsque les germes sont isolés à partir de prélèvements cliniques.

PRECAUTIONS
Le supplément sélectif pour Campylobacter (Karmali) contient du cycloheximide qui est toxique par inhalation, ingestion et au contact de la peau. Mettre des gants et des lunettes de protection pour le manipuler.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur la flacon et à l’abri de la lumière directe.
Conserver le supplément à 2–8°C et à l’obscurité.

CONTROLE DE QUALITE
Incubation à 42°C :
Contrôle positif :
Campylobacter jejuni ATCC® 29428.
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922 (inhibition partielle ou totale).

BIBLIOGRAPHIE
1 Karmali M.A., Simor A.E., Roscoe M., Fleming P.C., Smith S.S., and Lane J. (1986) J. Clin. Micro., 23, 456-459.
2 Skirrow M.B. and Benjamin J. (1980) J. Clin. Path., 33, 1122.