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CODE : CM0377

Milieu pour la recherche des entérocoques.

500 grammes permettent de préparer 12,0 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 41,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète.
EVITER UN CHAUFFAGE EXCESSIF.
Répartir en boîtes et laisser solidifier. Ne pas refondre. Le milieu peut être ensemencé avec des membranes filtrantes ou par étalement de l’échantillon dilué à la surface de la gélose.

DESCRIPTION
A l’origine, Slanetz et Bartley ¹ ont conçu ce milieu pour la recherche et la numération des entérocoques par la méthode de filtration sur membrane, mais il a aussi montré son utilité par ensemencement direct.^2,3
Ce milieu est très sélectif pour les entérocoques et lorsqu’il est incubé à température élevée (44–45°C), toutes les colonies rouges ou marron constituent une forte présomption d’entérocoques.^4,5
Burkwall et Hartman2 ont montré que l’addition de 0,5 ml de Tween 80 et de 20 ml d’une solution à 10 % de carbonate ou de bicarbonate de sodium dans un litre de milieu était intéressante pour rechercher les entérocoques dans les produits congelés ; consulter l’article original pour plus de détails sur cette méthode.²

UTILISATION
Dans son rapport 71, le “Department of Health”⁶ recommande d’utiliser ce milieu pour la numération des entérocoques dans les eaux. L’eau est filtrée sur une membrane qui est ensuite placée sur la surface bien sèche d’une boîte de milieu. Les boîtes sont incubées à 37°C pendant 4 heures puis à 44–45°C pendant 44 heures. Examiner les membranes sous un bon éclairage avec une loupe, et compter toutes les colonies rouges ou marron comme étant des entérocoques.
La méthode suggérée par le “Nordic Commitee of food analysis ³” permet de rechercher les entérocoques dans les aliments. Les échantillons sont homogénéisés et dilués en solution saline pour obtenir 15 à 150 colonies par boîte. Etaler l’échantillon dilué sur la surface de la gélose. Incuber les boîtes retournées à 37°C pendant 48 heures. Compter ensuite les colonies caractéristiques (roses ou rouge sombre avec un bord blanchâtre étroit).

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C à l’obscurité.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Enterococcus faecalis ATCC® 29212.
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922.

PRECAUTIONS
Compter toutes les colonies rouges, marron ou roses comme étant potentiellement des entérocoques. Mais toutes les espèces ne réduisant pas le TTC, il ne faut donc pas ignorer les colonies pâles.
Bien qu’une incubation à 37°C donne une numération plus élevée, elle permet à des germes qui ne sont pas des entérocoques de pousser. L’incubation à 44–45°C a un effet sélectif et donne moins de faux positifs. Cependant, une incubation préliminaire à 37°C favorise la récupération des germes stressés.
Bien que la sélectivité de ce milieu soit bonne, il est conseillé de considérer la numération des colonies comme présomptive. Il peut être nécessaire de confirmer l’identification.

BIBLIOGRAPHIE
1 Slanetz L.W. and Bartley C.H. (1957), J. Bact., 74, 591-595.
2 Burkwall M.K. and Hartman P.A. (1964), Appl. Microbiol.,12, 18-23.
3 Nordic Committee on Food Analysis (1968), Leaflet 68.
4 Taylor E.W. and Burman N.P. (1964), J. Appl. Bact., 27, 294-303.
5 Mead G.C. (1966), Proc. Soc. Wat. Treat. Exam., 15, 207-221.
6 Department of Health and Social Security Report 71 (1982), The Bacteriological Examination of Drinking Water Supplies, HMSO, London.