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500 grammes permettent de préparer 6,5 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 76,4 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition en agitant fréquemment. Laisser bouillir 5 minutes.* Refroidir à 50°C et ajouter stérilement 1 ml de solution stérile aqueuse à 1% de chlorure de 2,3,5-triphényltétrazolium à 100 ml de milieu. Répartir en boîtes de Pétri pour la technique sur membrane ou conserver à 45°C pour la technique en boîte coulée.
*Note : le milieu peut être autoclavé 10 minutes à 121°C si un pouvoir sélectif total est requis.

DESCRIPTION
La gélose streptocoque KF est basée sur la formule décrite par Kenner et coll.¹ et est recommandée pour l’isolement et la numération des entérocoques dans les fèces, le lait, l’eau et les autres produits par la méthode de filtration sur membrane ou en boîte coulée. La présence d’entérocoques dans l’échantillon est un indice de contamination fécale par l’homme ou l’animal. La gélose streptocoque KF est sélective des groupes D et Q cités ci-dessous :

Streptococcus avium (groupe Q) a été inclus dans le groupe des entérocoques à cause de ses critères biochimiques et antigéniques identiques à ceux du groupe D et il peut aussi être présent chez les animaux à sang chaud.
La recherche d’entérocoques peut fournir une information précise sur l’origine de la contamination car certains streptocoques ont des hôtes spécifiques. Par exemple, une prédominance de E. bovis et de E. equinus indique une contamination par des excréments animaux.
E. bovis et E. equinus sont des indices de contamination par des usines de viandes transformées, des eaux usées de laiterie ou des déchets de fermes.
La présence de ces entérocoques indique une contamination récente car ils ne survivent que peu de temps en dehors de leur habitat naturel. Le rapport coliformes/entérocoques peut aussi donner une information sur les sources possibles de contamination.²
Les colonies d’entérocoques sont rouges ou roses sur la membrane ou sur la boîte gélosée, et ont un diamètre qui varie de 0,3 à 2 mm.
Il est recommandé de compter les colonies à l’aide d’une loupe binoculaire à large champ (grossissement 10 à 15) ou autre appareil optique équivalent.

UTILISATION
Technique de filtration sur membrane :
1 Préparer la gélose streptocoque KF comme indiqué.
2 Filtrer l’échantillon sur membrane stérile pour avoir 20 à 100 colonies à la surface de la membrane. Selon le degré de pollution, utiliser des volumes de 100, 10, 1 ou 0,1 ou 0,01 ml.
3 Placer la membrane directement sur la surface de la gélose en évitant la formation de bulles d’air.
4 Incuber les boîtes à l’envers 48 heures à 37°C.
5. Compter toutes les colonies rouges ou roses avec une loupe binoculaire à large champ.
6 Calculer le nombre d’entérocoques et rapporter au nombre de streptocoques fécaux par 100 ml.
7 Confirmer l’identité des colonies comme étant des entérocoques.
Technique en boîte coulée :
1 Préparer la gélose streptocoque KF comme indiqué.
2 Préparer des dilutions de l’échantillon pour avoir 30 à 300 colonies. Pour la plupart des eaux potables, une numération convenable sera obtenue par ensemencement de 1 ml et 0,1 ml de l’échantillon non dilué et 1 ml de l’échantillon dilué au 1/100.
3 Verser le volume choisi dans une boîte de Pétri.
4 Ajouter 15 ml de milieu liquide dans chaque boîte.
5 Bien mélanger échantillon et milieu pour avoir une répartition uniforme des germes.
6 Faire solidifier la gélose aussi rapidement que possible.
7 Incuber les boîtes à l’envers 48 heures à 37°C.
8 Compter toutes les colonies rouges et roses à la surface et à l’intérieur du milieu.
9 Calculer le nombre d’entérocoques et rapporter au nombre de streptocoques fécaux par 100 ml.
10Confirmer l’identité des colonies comme étant des entérocoques.² Utiliser une oese pour atteindre les colonies au travers de la gélose.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10-25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver les boîtes coulées à 2-8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Enterococcus faecalis ATCC® 29212.
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922.

PRECAUTIONS
Lors de l’élimination du milieu, respecter les précautions mentionnées au paragraphe 2-3-8 au sujet de l’azoture de sodium.
Le pH du milieu ne doit pas chuter en dessous de 7,0 pour ne pas inhiber les entérocoques.¹
La gélose streptocoque KF n’est pas spécifique pour identifier les streptocoques du groupe D. Confirmer l’identité des germes isolés par des tests complémentaires.

BIBLIOGRAPHIE
1 Kenner B.A., Clark H.F. and Kabler P.W. (1961) J. Appl. Microbiol,. 9, 15-20.
2 American Public Health Association (1981) Standard Methodsfor the Examination of Water and Wastewater, 15th Edn.
APHA Inc. Washington DC