Organisms this product works with:
Other products used in the isolation of Escherichia coli O157:
CODE : CM0989
Milieu pour l’enrichissement sélectif des Escherichia coli O157 dans
les échantillons alimentaires et les faeces.
COMPOSITION |
(grammes/litre) |
Hydrolysat trypsique de caséine | 17,0 |
Peptone de soja |
3,0 |
Chlorure de sodium | 5,0 |
Hydrogénophosphate de dipotassium | 4,0 |
Glucose |
2,5 |
Sels biliaires | 1,5 |
pH 7,4 ± 0,2 |
500 grammes permettent de préparer 15 litres de milieu.
SUPPLEMENT VCC
CODE : SR0190
COMPOSITION |
(par flacon) |
Vancomycine |
8,0 |
Céfixime |
0,05 |
Cefsulodine |
10,0 |
PREPARATION
Verser 33 g de mTSB (CM0989) dans un litre d’eau distillée. Bien mélanger
et répartir. Stériliser à l’autoclave à 121°C
pendant 15 minutes. Refroidir le milieu à 50°C avant d’ajouter le
supplément approprié.
DESCRIPTION
Le mTSB a été conçu par Doyle et Schoeni 1. Le milieu
devait être incubé à 37°C pendant 24 heures. Szabo
et des co-auteurs ont aussi utilisé le mTSB et ont trouvé qu’une
incubation à 43°C sous agitation donnait une meilleure récupération
de germes à partir d’échantillons alimentaires.
L’Eau peptonée tamponnée (CM0509) supplémentée
avec le supplément VCC (SR0190) était utilisée pour l’isolement
de E. coli O157 à partir des carcasses de viandes, des faeces bovins,
du lait et de la viande hachée.
Dans le bouillon d’enrichissement EHEC
(EEB), le supplément VCC (SR0190)
est ajouté au mTSB (CM0989) utilisé à la place de l’eau
peptonée tamponnée pour surmonter les effets inhibiteurs sur
E. coli O157 2. Ces milieux (BPW-VCC et EEB-VCC) sont tous
les deux incubés
pendant 6 heures à 37°C.
Le bouillon Tryptone Soja (CM0129) a été modifié en augmentant
la concentration du tampon hydrogénophosphate dipotassique à 4
g/l et en ajoutant 1,5 g/l de sels biliaires. Ces derniers inhibent la croissance
des spores et des entérocoques, permettant ainsi la croissance d’E.
coli O157.
Le supplément VCC (SR0190) contient 3 antibiotiques :
. Vancomycine : pour
l’inhibition des Gram (+)
. Céfixime : pour l’inhibition des Proteus spp
. Cefsulodine : pour l’inhibition
des Pseudomonas spp
UTILISATION
1. ISO 5 / PHLS 6/ FDA / BAM 7 / NMKL 9
Préparer 500 ml de bouillon TSB modifié (CM0989). Ajouter un
flacon de novobiocine (SR0181) reconstitué avec 2 ml d’eau distillée
stérile. Incuber à 41,5°C pendant 6 h. et 22 h.
2. FDA / BAM 7
Préparer 225 ml de bouillon TSB modifié (CM0989). Ajouter un
flacon de supplément sélectif VCC (SR0190) reconstitué avec
4 ml d’eau distillée stérile. Incuber à 37°C sous
agitation pendant 6 h. et 24 h.
3. CCFRA 8
Préparer 225 ml d’Eau peptonée tamponnée (CM0509). Ajouter
un flacon de supplément VCC (SR0190) reconstitué avec 4 ml d’eau
distillée stérile. Incuber à 37°C pendant 6 h. et
24 h.
CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10-25°C, dans un
endroit sec, à l’obscurité jusqu’à la date de péremption
indiquée sur le flacon.
Le milieu prêt à l’emploi doit être utilisé le
plus rapidement possible.
CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif
Escherichia coli O157:H7 NCTC 12900
Contrôle négatif
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bacillus subtilis ATCC 6633
BIBLIOGRAPHIE
1. Doyle, M.P. and J.L. Schoeni (1987) Applied Environmental Microbiology 53 : 2394-2396.
2. Szabo R.E. et al (1990) Applied Environmental Microbiology 56 : 3546-3549.
3. Demarchelier, P.M. and Grau. F.H. (1997) Escherichia coli.
In : Foodborne Microorganisms of Public Health Significance, 5th Edition. pp.
231-264. A.D.
Hocking (Ed.) AIFST (NSW Branch) Food Microbiology Group. Australia.
4. Weagant
S. D. et al. (1995) Journal of Food Protection 58 : 7-12 .
5. Draft ISO : 16654
Microbiology of Food and Animal feed stuffs. Horizontal Methods for the detection
of E. coli O157 (Pub March 22, 1999, expired June
30 1999).
6. PHLS Standard Methods F17 & W16 : Detection of E. coli O157.
7. FDA/BAM
8th Edition (Revision A) (1998) Chapter 4 : 4.20-4.26.
8. Campden and Chorleywood
Food Research Association Method 19.1 : 1997. Detection of E. coli O157.
9. Nordic
Committee on Food Analysis No. 164 1999 Escherichia coli O157. Detection in Food
and feeding stuffs.