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CODE : CM0989

Milieu pour l’enrichissement sélectif des Escherichia coli O157 dans les échantillons alimentaires et les faeces.

500 grammes permettent de préparer 15 litres de milieu.

SUPPLEMENT VCC

CODE : SR0190

PREPARATION
Verser 33 g de mTSB (CM0989) dans un litre d’eau distillée. Bien mélanger et répartir. Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes. Refroidir le milieu à 50°C avant d’ajouter le supplément approprié.

DESCRIPTION
Le mTSB a été conçu par Doyle et Schoeni ¹. Le milieu devait être incubé à 37°C pendant 24 heures. Szabo et des co-auteurs ont aussi utilisé le mTSB et ont trouvé qu’une incubation à 43°C sous agitation donnait une meilleure récupération de germes à partir d’échantillons alimentaires.
L’Eau peptonée tamponnée (CM0509) supplémentée avec le supplément VCC (SR0190) était utilisée pour l’isolement de E. coli O157 à partir des carcasses de viandes, des faeces bovins, du lait et de la viande hachée.
Dans le bouillon d’enrichissement EHEC (EEB), le supplément VCC (SR0190) est ajouté au mTSB (CM0989) utilisé à la place de l’eau peptonée tamponnée pour surmonter les effets inhibiteurs sur E. coli O157 ². Ces milieux (BPW-VCC et EEB-VCC) sont tous les deux incubés pendant 6 heures à 37°C.
Le bouillon Tryptone Soja (CM0129) a été modifié en augmentant la concentration du tampon hydrogénophosphate dipotassique à 4 g/l et en ajoutant 1,5 g/l de sels biliaires. Ces derniers inhibent la croissance des spores et des entérocoques, permettant ainsi la croissance d’E. coli O157.
Le supplément VCC (SR0190) contient 3 antibiotiques :
. Vancomycine : pour l’inhibition des Gram (+)
. Céfixime : pour l’inhibition des Proteus spp
. Cefsulodine : pour l’inhibition des Pseudomonas spp

UTILISATION
1. ISO ⁵ / PHLS ⁶/ FDA / BAM ⁷ / NMKL ⁹
Préparer 500 ml de bouillon TSB modifié (CM0989). Ajouter un flacon de novobiocine (SR0181) reconstitué avec 2 ml d’eau distillée stérile. Incuber à 41,5°C pendant 6 h. et 22 h.
2. FDA / BAM ⁷
Préparer 225 ml de bouillon TSB modifié (CM0989). Ajouter un flacon de supplément sélectif VCC (SR0190) reconstitué avec 4 ml d’eau distillée stérile. Incuber à 37°C sous agitation pendant 6 h. et 24 h.
3. CCFRA ⁸
Préparer 225 ml d’Eau peptonée tamponnée (CM0509). Ajouter un flacon de supplément VCC (SR0190) reconstitué avec 4 ml d’eau distillée stérile. Incuber à 37°C pendant 6 h. et 24 h.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10-25°C, dans un endroit sec, à l’obscurité jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Le milieu prêt à l’emploi doit être utilisé le plus rapidement possible.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif
Escherichia coli O157:H7 NCTC 12900
Contrôle négatif
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bacillus subtilis ATCC 6633

BIBLIOGRAPHIE
1. Doyle, M.P. and J.L. Schoeni (1987) Applied Environmental Microbiology 53 : 2394-2396.
2. Szabo R.E. et al (1990) Applied Environmental Microbiology 56 : 3546-3549.
3. Demarchelier, P.M. and Grau. F.H. (1997) Escherichia coli. In : Foodborne Microorganisms of Public Health Significance, 5th Edition. pp. 231-264. A.D. Hocking (Ed.) AIFST (NSW Branch) Food Microbiology Group. Australia.
4. Weagant S. D. et al. (1995) Journal of Food Protection 58 : 7-12 .
5. Draft ISO : 16654 Microbiology of Food and Animal feed stuffs. Horizontal Methods for the detection of E. coli O157 (Pub March 22, 1999, expired June 30 1999).
6. PHLS Standard Methods F17 & W16 : Detection of E. coli O157.
7. FDA/BAM 8th Edition (Revision A) (1998) Chapter 4 : 4.20-4.26.
8. Campden and Chorleywood Food Research Association Method 19.1 : 1997. Detection of E. coli O157.
9. Nordic Committee on Food Analysis No. 164 1999 Escherichia coli O157. Detection in Food and feeding stuffs.