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CODE : CM0990

Bouillon d’enrichissement pour la détection des E. coli O157:H7 dans les échantillons alimentaires.

500 grammes permettent de préparer 13,6 litres de milieu.

SUPPLEMENT NOVOBIOCINE

CODE : SR0181

PREPARATION
Verser 18,3 g de poudre dans 500 ml d’eau distillée. Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes. Refroidir à 50°C et ajouter stérilement un flacon de supplément de novobiocine (SR0181) avec 2 ml d’eau distillée stérile.

DESCRIPTION
Les E. coli O157 se trouvent parfois sous forme stressées dans les échantillons alimentaires (échantillons congelés, réfrigérés ou cuits). Traditionnellement, les milieux de culture contiennent des sels biliaires à un taux de 1,5 g/l. Ce taux n’est pas adapté à la croissance des E. coli 157, qui vont croître faiblement ou seront inhibés. En réduisant la teneur en sels biliaires dans le bouillon à 1,12 g/l, les bactéries stressées pourront être récupérées. Cette réduction des sels biliaires n’affecte en aucun cas l’inhibition de la flore compétitive.
La réduction de la température d’incubation de 44°C à 35-37°C optimisera la croissance des E. coli en général. Cependant, l’addition de novobiocine (SR0181) à 20 mg/l augmente l’inhibition de la flore compétitive sans pour autant diminuer la croissance de E. coli O157.

UTILISATION
Les échantillons sont dilués au 1/10^e dans du bouillon EC modifié à la novobiocine (CM0990B + SR0181E). Le broyage s’effectue en stomacher pendant 2 minutes. Ces échantillons peuvent être soit incubés pendant 6 heures à 37°C sous agitation rotative (100 rpm) ou sans agitation pendant 24 h. à 35°C.
Préparer les échantillons suivant les recommandations de USDA/FSIS.
Viande hachée
Peser 5 x 65 g d’échantillon (325 g au total). Placer chaque échantillon dans un sac stomacher avec filtre puis le tout dans un deuxième sac stomacher. Ajouter 300 ml de bouillon mEC + n (CM0990 + SR181). Stomacher pendant 2 minutes. Ajouter la quantité restant de mEC + (285 ml) pour avoir un poids total de 650 g (dilution au 1/10^e).
Saucisse sèche
Découper les saucisses en cubes (avec la peau). Peser 5 x 65 g d’échantillons. Répartir dans 5 sacs stomacher stériles. Ajouter 585 ml de mEC + n (dilution au 1/10e). Stomacher pendant 2 minutes.
Viande cuite
Peser 13 x 25 g d’échantillon (325 g au total). Placer chaque échantillon dans un sac stomacher avec filtre puis le tout dans un deuxième sac stomacher. Ajouter 225 ml de bouillon mEC + n et stomacher pendant 2 minutes.
Pour tous ces échantillons, l’USDA/FSIS recommande une incubation sang agitation à 35°C pendant 18-24 heures.
Après incubation, diluer les cultures agitées à 10^-2 et le bouillon de culture incubé pendant 18-24 h. à 10^-6. Isoler sur des milieux sélectifs appropriés tels que la gélose Mac Conkey au sorbitol - SMAC (CM0813) ou la gélose SMAC + ßBCIG (CM0981). Le supplément CT (Céfixime Tellurite) peut être ajouté pour augmenter la sélectivité de chaque milieu de culture. Incuber les boîtes à 37°C pendant 24 heures. Les souches de E. coli O157 apparaîtront sous forme de colonies claires et incolores. Confirmer les colonies suspectes avec le test au latex E. coli 0157 (DR0620) ou le test E. coli O157 Dryspot (DR0120).

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10-25°C, dans un endroit sec, à l’obscurité jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi pendant 4 semaines à 2-8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif
Escherichia coli O157:H7 NCTC 12900
Escherichia coli ATCC 25922
Contrôle négatif
Bacillus subtilis ATCC 6633

BIBLIOGRAPHIE
1. Thomas, A., Cheasty, T., Frost, J. A., Chart, H., Smith, H. R. and Rowe, B. (1996) Epidemiol. Infect. 117, 1-110.
2. Willshaw, G. A., Thirwell, J., Jones, A. P., Parry, S., Salmon, R.L., Hickey, M. (1994) Letts. Appl. Microbiol. 19, 423-439.
3. Desmarchelier, P.M. and Grau, F. H. (1997) Escherichia coli. In : Foodborne Microorganisms of Public Health Significance. 5th Edition. pp 231-264. A. D. Hocking (Ed.) AIFST (NSW Branch) Food Microbiology Group, Australia.
4. Okrend, A. J. G., Rose, B. E. and Lattuada, C.P. (1990) J. Food Prot. 53, 941-943.
5. USDA/FSIS Microbiology Laboratory Guidebook 3rd Ed. (1998) Chapter 5. Detection, Isolation and Identification of Escherichia coli O157:H7 and O157:NM (Non Motile) from Meat and Poultry Products.