Oxoid - Product Detail

COMPOSITION DU COFFRET
Coffret de 120 tests
DR0121M Cartes de réaction E. coli 0157 Dryspot particules de latex bleues sensibilisées par un anticorps qui réagit avec l’antigène de E. coli sérogroupe 0157. 4 sachets contenant chacun 10 cartes et un dessicateur. Il y a 3 zones test et 3 zones de contrôle de la réaction sur chaque carte, soit 120 tests au total.
DR0122M Bandes de contrôle positif (10 sticks - spots roses) Extrait antigénique de E. coli 0157 inactivé et coloré en rose.
DR0123M Bandes de contrôle négatif (10 sticks - spots verts) Extrait antigénique de E. coli 0116 inactivé et coloré en vert.
Pastettes

Fiche technique
Matériel nécessaire, mais non fourni
Solution saline (0,9 % de NaCl préparé avec de l’eau distillée ou désionisée)

PRINCIPE
Les E. coli entéro-hémorragiques appartiennent à différents sérogroupes 0 parmi lesquels le 0157 est le plus fréquent en pathologie humaine.
Les souches produisant des vérocytotoxines (VT) sont associées à une série de symptômes allant de la diarrhée non hémorragique, de la fièvre et du vomissement à la colite hémorragique (HC) et au syndrome urémique hémolytique (HUS).
Le test au latex E. coli 0157 Dryspot permet de mettre en évidence par une agglutination sur lame les souches de E. coli possédant l’antigène du sérogroupe 0157. Il est conseillé d’utiliser avec ce test la gélose Mac Conkey au sorbitol (CM0813) ou la gélose Mac Conkey au sorbitol additionnée du supplément Cefixime Tellurite (SR0172).
La plupart des souches de E. coli 0157:H7 ne fermentent pas le sorbitol et donnent donc des colonies incolores sur ce milieu. La plupart des souches qui ne sont pas des E. coli 0157 fermentent le sorbitol et donnent des colonies roses caractéristiques.
Il est conseillé d’utiliser la gélose Mac Conkey au sorbitol comme test de screening. Les colonies qui ne fermentent pas le sorbitol, peuvent ensuite être testées avec les réactifs au latex, pour confirmer que la souche isolée appartient bien au sérogroupe 0157 et peut donc produire une vérocytotoxine.
On peut confirmer la production d’une vérocytotoxine avec le test VTEC-RPLA OXOID (TD960).
Contrôles
Les bandes de contrôle déshydraté doivent être utilisées une fois par jour avant de faire les tests, de façon à vérifier la validité des réactifs.
Déposer 50 ml de solution saline sur la carte de réaction (sur le cercle prévu à cet effet). Retirer un stick de contrôle positif du sachet en prenant soin de ne pas toucher l’extrémité flexible où se trouvent les Dryspots. Refermer les sachets. Tourner le stick de façon à ce que les spots colorés se trouvent en bas et placer le stick sur la carte, les spots touchant le liquide. Pousser vers le bas de façon à ce que l’extrémité plie à la charnière et mélanger de façon circulaire pendant 10 secondes pour réhydrater le réactif sec. Continuer de mélanger jusqu’à ce que tous les réactifs soient complètement réhydratés et homogènes. Imprimer à la carte un mouvement de rotation circulaire et observer l’agglutination. Répéter cette procédure avec le stick de contrôle négatif.
Le contrôle positif DR0122 doit donner une agglutination avec le réactif déshydraté en 1 minute.
Le contrôle négatif DR0123 ne doit pas donner d’agglutination en 1 minute.
Ne pas utiliser les réactifs si les contrôles sont incorrects.

MODE OPERATOIRE
1. Ajouter une goutte (50 µl) de solution saline (0,9 %) sur les petits cercles (à la base de chaque zone de réaction), à la fois dans les zones de test et dans les zones de contrôle. Le liquide ne doit pas se mélanger aux latex déshydratés.
2. A l’aide d’une oese stérile (ou d’une des pastettes fournies), prélever à partir d’une boîte de milieu de culture un peu de la colonie à tester et l’émulsionner doucement dans la solution saline.
La suspension obtenue doit être homogène.
3. A l’aide de la pastette fournie, bien mélanger la suspension dans les spots de latex déshydraté jusqu’à complète homogénéisation et recouvrir toute la zone de réaction. Eliminer la pastette de façon appropriée.
4. En utilisant une autre oese ou une autre pastette, procéder de la même façon avec le latex de contrôle.
5. Imprimer à la carte un mouvement de rotation douce pendant 60 secondes environ et observer l’agglutination sous une lumière normale. Ne pas utiliser de loupe pour la lecture.
6. Une fois le test terminé, éliminer les cartes de réaction dans une solution désinfectante.

LECTURE ET INTERPRETATION DES RESULTATS
Résultat positif :
Un résultat est considéré comme positif s’il y a agglutination des particules de latex en moins d’1 minute (présence de E. coli sérogroupe 0157).
Résultat négatif :
Le résultat est négatif s’il n’y a pas d’agglutination et si le latex demeure uniformément bleu en 1 minute. Ne pas tenir compte d’une réaction apparaissant après 1 minute.

CONSERVATION
Conserver le coffret à 2-25°C jusqu’à la date de péremption.

BIBLIOGRAPHIE
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