Part of Thermo Fisher Scientific
Organisms this product works with:
Other products used in the isolation of Escherichia coli O157:
MAC CONKEY AU SORBITOL (GELOSE) (S.M.A.C.)
CODE : CM0813
Milieu sélectif et différentiel pour la recherche d’Escherichia
coli 0157: H7.
COMPOSITION |
(grammes/litre) |
Peptone | 20,0 |
Sorbitol | 10,0 |
Sels biliaires n°3 | 1,5 |
Chlorure de sodium | 5,0 |
Rouge neutre | 0,03 |
Cristal violet | 0,001 |
Agar | 15,0 |
pH 7,1 ± 0,2 |
500 grammes permettent de préparer 9,7 litres de milieu.
PREPARATION
Verser 51,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition
jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.
DESCRIPTION
La gélose de Mac Conkey au sorbitol est basée sur la formule
mise au point par Rappaport et Henig1, et est recommandée pour la recherche
d’Escherichia coli 0157 : H7. La composition est identique à celle
de la gélose de Mac Conkey n°3 mais le lactose a été remplacé par
du sorbitol. E. coli 0157 : H7 ne fermente pas le sorbitol et produit donc
des colonies incolores, alors que la plupart des autres souches d’E.
coli le fermentent et donnent des colonies roses. March et Ratnam 2 ont confirmé l’intérêt
de la gélose de Mac Conkey au sorbitol. Ils ont noté que ce milieu
avait une sensibilité de 100 % et une spécificité de 85
% pour la recherche d’E. coli 0157 : H7, et qu’il constitue un
moyen de dépistage rapide, simple et économique de ce germe.
E. coli O157 : H7 a été reconnu récemment comme responsable
de colite hémorragique, caractérisée par une diarrhée
sanglante et des douleurs abdominales intenses. Il y a un lien évident
entre E. coli O157 : H7 et les colites hémorragiques associées
au syndrôme urémique hémolytique (SUH).3,4,5,6,7
UTILISATION
1 Préparer la gélose comme indiqué et répartir.
Si nécessaire, sécher la surface de la gélose.
2 Ensemencer les boîtes avec une suspension d’aliments, de selles,
etc… pour avoir des colonies séparées.
3 Incuber 24 heures à 37°C. Deyle et Schoeni8 ont observé que
35-37°C est la température optimale de croissance d’E.
coli O157 : H7. A 44-45,5°C, ce sérotype ne pousse pas bien, même
après 48 heures d’incubation.
Eviter d’observer les boîtes après 24 heures car l’intensité des
colonies qui fermentent le sorbitol diminue, ceci réduisant la différence
de coloration avec les colonies qui ne fermentent pas le sorbitol.
D’autres germes Gram – tels que Pseudomonas, Proteus et Klebsiella peuvent pousser sur la gélose de Mac Conkey au sorbitol, mais l’aspect
de leurs colonies permet généralement de les différencier.
Le test au latex pour le diagnostic d’E. coli O157 (DR0620) permet de
confirmer rapidement, l’identité des colonies suspectes.
Morphologie des colonies :
Escherichia coli O157 : H7 donnera des colonies incolores différentes
des colonies caractéristiques d’E. coli.
CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la
date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver les boîtes prêtes à l’emploi à 2–8°C.
CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Escherichia coli O157 : H7
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922.
PRECAUTIONS
Bien que la grande majorité des souches d’E. coli O157 : H7 ait
un aspect caractéristique sur la gélose de Mac Conkey au sorbitol,
certaines souches sont atypiques.9 Ce milieu ne peut pas être utilisé seul
pour rechercher les souches ECVT car certaines souches non toxiques ne fermentent
pas le sorbitol.10
BIBLIOGRAPHIE
1 Rappaport F. and Hening E. (1952), J. Clin. Path., 5, 361.
2 March S.B. and Ratnam S. (1986), J. Clin. Microbiol., 23, 869-872.
3 Centers for Disease Control 1985 - United States, 1984, Morbid Mortal
Weekly Rep., 34, 20-21.
4 Karmali M.A., Petric M., Lim C., Fleming P.C., Arbus G.S. and Lior H. (1985),
J. Infect. Dis., 151, 775-782.
5 Karmali M.A., Steele B.T., Petric M. and Lim C. (1983), Lancet i ; 619-620.
6 Pai C.H., Gordon R., Sims H.V. and Bryant L.E. (1984), Ann. Intern. Med., 101, 738-742.
7 Waters J.R. (1985), Can. Dis. Weekly Rep., 11, 123-124.
8 Doyle M.P. and Schoeni S.L. (1984), Appl. and Envir. Microbiol., 48, 855-856.
9 Karmali M.A. (1988), Culture, 9, 2.
10 Lior H. and Borcryk A. (1987), Lancet, i, 333.
SUPPLEMENT CEFIXIME-TELLURITE
CODE : SR0172
COMPOSITION |
(par flacon) |
Tellurite de potassium | 1,25 mg |
Cefixime |
0,025mg |
Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu.
PREPARATION
Reconstituer un flacon avec 2 ml d’eau distillée stérile. Mélanger
doucement jusqu’à dissolution complète. Ajouter un flacon de
SR0172 à 500 ml de gélose Mac Conkey Sorbitol refroidie à 50°C.
Bien mélanger et répartir en boîtes de Pétri stériles.
DESCRIPTION
Chapman et ses collaborateurs ont ajouté du céfixime et du tellurite
de potassium au milieu Mac Conkey Sorbitol afin d’améliorer la sélectivité.
Le taux de tellurite de potassium permet de sélectionner les E.
coli O157 des autres sérogroupes d’E. coli et inhibe les Providencia spp
et les Aeromonas.
Le céfixime inhibe les Proteus spp.
L’utilisation du céfixime et du tellurite de potassium permettant l’isolement
d’E. coli O157:H7 sur milieu Mac Conkey Sorbitol a été décrite
dans la méthode FDA/BAM.