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Featured Organism: Escherichia coli O157

MAC CONKEY AU SORBITOL (GELOSE) (S.M.A.C.)

CODE : CM0813

Milieu sélectif et différentiel pour la recherche d’Escherichia coli 0157: H7.

500 grammes permettent de préparer 9,7 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 51,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.

DESCRIPTION
La gélose de Mac Conkey au sorbitol est basée sur la formule mise au point par Rappaport et Henig¹, et est recommandée pour la recherche d’Escherichia coli 0157 : H7. La composition est identique à celle de la gélose de Mac Conkey n°3 mais le lactose a été remplacé par du sorbitol. E. coli 0157 : H7 ne fermente pas le sorbitol et produit donc des colonies incolores, alors que la plupart des autres souches d’E. coli le fermentent et donnent des colonies roses. March et Ratnam ² ont confirmé l’intérêt de la gélose de Mac Conkey au sorbitol. Ils ont noté que ce milieu avait une sensibilité de 100 % et une spécificité de 85 % pour la recherche d’E. coli 0157 : H7, et qu’il constitue un moyen de dépistage rapide, simple et économique de ce germe.
E. coli O157 : H7 a été reconnu récemment comme responsable de colite hémorragique, caractérisée par une diarrhée sanglante et des douleurs abdominales intenses. Il y a un lien évident entre E. coli O157 : H7 et les colites hémorragiques associées au syndrôme urémique hémolytique (SUH).^3,4,5,6,7

UTILISATION
1 Préparer la gélose comme indiqué et répartir. Si nécessaire, sécher la surface de la gélose.
2 Ensemencer les boîtes avec une suspension d’aliments, de selles, etc… pour avoir des colonies séparées.
3 Incuber 24 heures à 37°C. Deyle et Schoeni8 ont observé que 35-37°C est la température optimale de croissance d’E. coli O157 : H7. A 44-45,5°C, ce sérotype ne pousse pas bien, même après 48 heures d’incubation.
Eviter d’observer les boîtes après 24 heures car l’intensité des colonies qui fermentent le sorbitol diminue, ceci réduisant la différence de coloration avec les colonies qui ne fermentent pas le sorbitol.
D’autres germes Gram – tels que Pseudomonas, Proteus et Klebsiella peuvent pousser sur la gélose de Mac Conkey au sorbitol, mais l’aspect de leurs colonies permet généralement de les différencier.
Le test au latex pour le diagnostic d’E. coli O157 (DR0620) permet de confirmer rapidement, l’identité des colonies suspectes.
Morphologie des colonies :
Escherichia coli O157 : H7 donnera des colonies incolores différentes des colonies caractéristiques d’E. coli.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver les boîtes prêtes à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Escherichia coli O157 : H7
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922.

PRECAUTIONS
Bien que la grande majorité des souches d’E. coli O157 : H7 ait un aspect caractéristique sur la gélose de Mac Conkey au sorbitol, certaines souches sont atypiques.⁹ Ce milieu ne peut pas être utilisé seul pour rechercher les souches ECVT car certaines souches non toxiques ne fermentent pas le sorbitol.¹⁰

BIBLIOGRAPHIE
1 Rappaport F. and Hening E. (1952), J. Clin. Path., 5, 361.
2 March S.B. and Ratnam S. (1986), J. Clin. Microbiol., 23, 869-872.
3 Centers for Disease Control 1985 - United States, 1984, Morbid Mortal Weekly Rep., 34, 20-21.
4 Karmali M.A., Petric M., Lim C., Fleming P.C., Arbus G.S. and Lior H. (1985), J. Infect. Dis., 151, 775-782.
5 Karmali M.A., Steele B.T., Petric M. and Lim C. (1983), Lancet i ; 619-620.
6 Pai C.H., Gordon R., Sims H.V. and Bryant L.E. (1984), Ann. Intern. Med., 101, 738-742.
7 Waters J.R. (1985), Can. Dis. Weekly Rep., 11, 123-124.
8 Doyle M.P. and Schoeni S.L. (1984), Appl. and Envir. Microbiol., 48, 855-856.
9 Karmali M.A. (1988), Culture, 9, 2.
10 Lior H. and Borcryk A. (1987), Lancet, i, 333.

SUPPLEMENT CEFIXIME-TELLURITE

CODE : SR0172

Chaque flacon permet de supplémenter 500 ml de milieu.

PREPARATION
Reconstituer un flacon avec 2 ml d’eau distillée stérile. Mélanger doucement jusqu’à dissolution complète. Ajouter un flacon de SR0172 à 500 ml de gélose Mac Conkey Sorbitol refroidie à 50°C. Bien mélanger et répartir en boîtes de Pétri stériles.

DESCRIPTION
Chapman et ses collaborateurs ont ajouté du céfixime et du tellurite de potassium au milieu Mac Conkey Sorbitol afin d’améliorer la sélectivité. Le taux de tellurite de potassium permet de sélectionner les E. coli O157 des autres sérogroupes d’E. coli et inhibe les Providencia spp et les Aeromonas.
Le céfixime inhibe les Proteus spp.
L’utilisation du céfixime et du tellurite de potassium permettant l’isolement d’E. coli O157:H7 sur milieu Mac Conkey Sorbitol a été décrite dans la méthode FDA/BAM.