Part of Thermo Fisher Scientific
Organisms this product works with:
Other products used in the isolation of Lactobacilli:
MRS (GELOSE) (De Man, Rogosa, Sharpe)
CODE : CM0361
Version solide du bouillon MRS pour la culture des bactéries lactiques.
COMPOSITION |
(grammes/litre) |
Peptone | 10,0 |
Extrait de viande de boeuf | 8,0 |
Extrait de levure | 4,0 |
Glucose | 20,0 |
Tween 80 | 1,0 ml |
Hydrogénophosphate de potassium | 2,0 |
Acétate de sodium 3 H2O | 5,0 |
Citrate d’ammonium | 2,0 |
Sulfate de magnésium 7 H2O |
0,2 |
Sulfate de manganèse 4 H2O | 0,05 |
Agar | 10,0 |
pH 6,2 ± 0,2 |
500 grammes permettent de préparer 8 litres de milieu.
PREPARATION
Verser 62 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition
jusqu’à dissolution complète. Répartir et stériliser
15 minutes à 121°C à l’autoclave.
DESCRIPTION
La formule du milieu MRS a été mise au point par De Man, Rogosa
et Sharpe 1 afin de remplacer un produit variable (jus de tomate) et de fournir
en même temps un milieu propice au bon développement des lactobacilles
en général, y compris des souches poussant faiblement sur les
milieux existants.
Le milieu MRS est supérieur au milieu au jus de tomate de Briggs 2 et
au milieu au jus de tomate et à l’extrait de viande de De Man.
Il permet une pousse plus abondante de toutes les souches de lactobacilles,
et plus particulièrement des souches à développement lent
et difficile comme L. brevis et L. fermenti.
La gélose et le bouillon MRS favorisent la pousse des bactéries
lactiques. Elles sont Gram +, catalase et oxydase –, et exigeantes dans
leurs besoins nutritifs. Leur croissance est considérablement améliorée
en microaérophilie.
Généralement, les bactéries lactiques poussent tardivement
en donnant de plus petites colonies que les autres microorganismes. Ces derniers
peuvent envahir les milieux non sélectifs, surtout lors d’incubation
de 2 à 4 jours.
Le pH du milieu peut servir de moyen de sélection puisque les Lactobacillus tolèrent un pH plus bas que les Streptococcus (pH 5,0–6,5), les
Pediococcus et Leuconostoc qui se développent mieux dans cette zone
de pH. Les inhibiteurs de la microflore associée sont : l’acétate
de thallium, l’acétate de sodium, l’acide sorbique, l’acide
acétique, le nitrate de sodium, le cycloheximide et la polymyxine. Ces
substances peuvent être utilisées à des concentrations
variables et associées entre elles, mais il faut trouver un compromis
entre la sélectivité du milieu et la croissance du germe recherché.3
La gélose MRS contenant de l’acide sorbique a été décrite. 3,4
C’est un milieu MRS avec un pH abaissé à 5,7 et contenant
0,14 % (pds/vol) d’acide sorbique (= 0,2 % (pds/vol) de sorbate de potassium).
Les lactobacilles sont microaérophiles et exigent généralement
une technique en double couche pour la culture sur milieu solide en aérobiose.
Les colonies obtenues en profondeur ou en surface peuvent être rugueuses
ou lisses ; elles sont petites, opaques et plus ou moins blanches.
UTILISATION
Les produits à examiner sont mis à macérer ou dilués
dans une solution de Ringer au quart ; les autres dilutions sont ensuite faites
dans le bouillon MRS.
Mettre 1 ml d’échantillon dilué dans des boîtes de
Pétri stériles, et ajouter la gélose MRS fondue à 45°C,
puis mélanger soigneusement.
Après solidification, ajouter une nouvelle couche de gélose MRS,
non ensemencée, à la surface.
Incuber les boîtes comme indiqué ci-dessous. Il est important
d’avoir une atmosphère humide adéquate au-dessus de la
gélose, afin qu’elle ne sèche pas lors de l’incubation,
car ceci concentrerait les facteurs sélectifs en surface et rendrait
le milieu inhibiteur.
Le CO2 stimule la croissance des germes et les boîtes doivent être
incubées sous 5 % de CO2. Le milieu MRS est sélectif pour les
Lactobacillus mais quelques Leuconostoc et Pediococcus peuvent s’y développer.
Méthode d’incubation :
42°C thermophile : | 2 jours |
37°C mésophiles : | 2 jours |
30°C + 22°C mésophiles–psychrophiles : | 2 + 1 jours |
25°C psychrophile : | 3 jours |
Incubation en anaérobiose ou microaérophilie : confirmer les colonies suspectes par coloration de Gram ; les prélever en bouillon MRS. Ce bouillon a l’avantage de ne pas permettre aux autres germes, initialement inhibés sur gélose sélective, de se multiplier et ceci, à la différence du bouillon non sélectif. Incuber les tubes de bouillon à la même température et pendant le même temps que pour la gélose MRS, puis confirmer l’identification des germes isolés par examen microscopique et repiquage sur gélose MRS.
Le bouillon MRS peut être utilisé pour d’autres tests d’identification des Lactobacillus, tels que la température de croissance, la croissance en présence de 4 % de NaCl, en présence de 0,4 % de Teepol, etc…, comme indiqué par Sharpe, Fryer et Smith.5
CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Lactobacillus acidophilus ATCC® 19992
Contrôle négatif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923.
BIBLIOGRAPHIE
1 Man J.C., de Rogosa M. and Sharpe, M. Elisabeth (1960), Appl. Bact.,
23, 130-135.
2 Briggs M. (1953), J. Dairy Res., 20, 36-40.
3 Reuter G. (1985), Intern. J. Food Microbiol., 2, 55-68.
4 ISO/TC 34/SC 6/WG 15, No 3 and 5 (1984), Enumeration of Lactobacteriaceae
in meat and meat products.
5 Sharpe, M. Elisabeth, Fryer T.F. and Smith D.G. (1966)“ Identification
of the Lactic Acid Bacteria” in“ Identification Method for Microbiologists
Part A” (Gibbs B.M. and Skinner F.A. eds.), London and New York,
Academic Press, p. 65-79.