• Home |
• Contacts |
• Quality Standards |
• Instructions for Use |
• Careers

M 17 (GELOSE)

CODE : CM0785

Pour améliorer la croissance des streptocoques lactiques et celle de leurs bactériophages, et pour dénombrer sélectivement Streptococcus thermophilus dans les yaourts.

500 grammes permettent de préparer 10,4 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 48,25 g de poudre dans 950 ml d’eau distillée et porter doucement à ébullition. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C et ajouter 50 ml d’une solution stérile de lactose à 10 % (pds/vol).
Solution de lactose à 10 % (pds/vol) :
Dissoudre 10 g de lactose LP0070 dans 100 ml d’eau distillée. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave ou par filtration sur membrane de 0,2 µm.

DESCRIPTION
La gélose M 17 (CM0785) est basée sur la formule décrite par Terzaghi et Sandine1. Elle est recommandée pour favoriser la pousse et la numération des streptocoques lactiques et de leurs bactériophages.
Les streptocoques lactiques sont exigeants et demandent des milieux nutritifs complexes pour une croissance optimale.2,3 Ils produisent naturellement une homofermentation acide qui nécessite un milieu bien tamponné pour que le pH reste au-dessus de 5,7 pendant leur croissance. Le maintien du pH est important, car une baisse de ce dernier peut léser les germes et réduire ainsi le nombre de streptocoques lactiques recherchés.

La gélose M 17 contient du glycérophosphate disodique qui a un pouvoir tampon suffisant pour maintenir le pH au-dessus de 5,7, même après 24 heures à 30°C. Cet agent tampon permet aussi d’ajouter du calcium dans le milieu sans précipitation du complexe formé. Le calcium est utile pour rechercher les bactériophages des streptocoques lactiques.1
Shankar et Davies4 ont noté que la gélose M 17 convenait à l’isolement et la numération de Streptococcus thermophilus dans les yaourts, car la forte concentration de glycérophosphate disodique entraîne la suppression de Lactobacillus bulgaricus.
La gélose M 17 a été recommandée par la Fédération Internationale Laitière pour la numération sélective de Streptococcus thermophilus dans les yaourts.

La gélose M 17 permet aussi la pousse et la conservation des cultures de départ dans les fabriques de fromages et de yaourts, car elle empêche leur production d’acide dans le lait à 30°C et à 22°C.
De plus, la gélose permet de rechercher les streptocoques mutants incapables de fermenter le lactose.1 Ces souches mutantes lac – donnent des colonies plus petites que celles fermentant le lactose.

UTILISATION
Recherche des bactériophages :
Consulter l’article de Terzaghi et Sandine1 pour une description détaillée de cette méthode.
Numération de Streptococcus thermophilus dans le yaourt :
1 Mélanger pour homogénéiser l’échantillon de yaourt.
2 Peser 10 ± 0,1 g de yaourt à tester dans un tube à centrifuger à fond rond de 200 ml, en verre résistant ou dans le récipient d’un mélangeur mécanique.
3 Ajouter une solution stérile d’eau peptonée* à 0,1 % (pds/vol) au yaourt à tester jusqu’à ce que la masse de l’ensemble soit de 50 g.
4 Préparer une série de dilutions décimales de la suspension de yaourt dans des volumes de 9 ml d’eau peptonée stérile à 0,1 % (pds/vol).
5 i) Pour chaque dilution, ensemencer deux géloses M 17 et de façon à obtenir des colonies isolées.
ii) Mettre 1 ml de chaque dilution dans deux boîtes de Pétri et ajouter 14 ml de gélose M 17 stérile chauffée à 43°C ± 1°C.
6 Incuber 48 heures à 37°C.
7 Lire les boîtes après 24 et 48 heures d’incubation. Les colonies de Streptococcus thermophilus sont visibles après 18 - 24 heures. Après 48 heures, on obtient des colonies de 1 à 2 mm de diamètre. Lactobacillus bulgaricus ne pousse pas sur ce milieu ou donne de très petites colonies.
8 Compter les colonies par la méthode en boîte coulée et exprimer les résultats en nombre de UFC/g d’échantillon.

Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.

CONFIRMATION DES RESULTATS
Les colonies isolées à partir de produits laitiers suspectées d’être Streptococcus thermophilus peuvent être confirmées par la coloration de Gram (cocci Gram+) et la recherche de catalase (négative).

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Streptococcus thermophilus ATCC® 14486
Contrôle négatif :
Lactobacillus bulgaricus ATCC® 11842.

BIBLIOGRAPHIE
1 Terzaghi B.E. and Sandine W.E. (1975), Applied Microbiology.,29, 807-813.
2 Anderson A.W. and Elliker P.R. (1953), J. Dairy Science, 36, 161-167.
3 Reiter B. and Oram J.D. (1962), J. Dairy Res., 29, 63-77.
4 Shankar P.A. and Davies F.L. (1977), J. Soc. DairyTechnology., 30, 28-30.
5 International Dairy Federation (1981), Joint IDF/ISO/AOAC, Group E44.
6 International Organization for Standardization (1985)  ISO/DIS 7889.