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CODE : CM0627

Milieu sélectif pour l’isolement et la numération des lactobacilles.

500 grammes permettent de préparer 6,1 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 82 g de poudre dans un litre d’eau distillée et porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Ajouter 1,32 ml d’acide acétique glacial et mélanger soigneusement. Chauffer 2 à 3 minutes à 90-100°C en agitant souvent. Répartir. NE PAS AUTOCLAVER.

DESCRIPTION
La gélose Rogosa, modification du milieu décrit par Rogosa et coll.¹, est un milieu sélectif pour l’isolement et la numération des lactobacilles.
Ce milieu a donné d’excellents résultats lors d’études qualitatives et quantitatives sur les lactobacilles présents dans les selles, la salive et les produits laitiers. C’est un milieu sélectif efficace pour les lactobacilles, mais sa concentration élevée en acétate et son pH bas inhibent de nombreuses souches d’autres bactéries lactiques.
Si le pH du milieu est ajusté à 6,2 sans addition d’acide acétique, la sélectivité du milieu est diminuée et toutes les bactéries lactiques pousseront.^2,3

UTILISATION
Pour isoler les lactobacilles, Sharpe⁴ recommande d’incuber les boîtes de milieu 3 jours à 37°C ou 5 jours à 30°C, de préférence dans une atmosphère contenant 95 % d’hydrogène et 5 % de dioxyde de carbone ; ceci évite l’évaporation, fournit les conditions microaérophiles favorables aux lactobacilles ; de plus, le dioxyde de carbone a un effet stimulant sur leur croissance. Si on ne dispose pas de jarre, recouvrir les boîtes ensemencées avec une seconde couche de gélose Rogosa, avant incubation.
Les bactéries lactiques thermophiles sont incubées 48 heures à 42°C et les éventuels germes psychrophiles 2 jours à 30°C et un jour supplémentaire à 22°C. Les Leuconostoc présents dans la viande sont incubés 3 jours à 25°C.
Après incubation, toutes les colonies qui sont bien développées, peuvent être considérées comme des bactéries lactiques, alors que les entérocoques et les pédiocoques présentent une faible croissance sur ce milieu. Quelques Leuconostoc isolés de la viande produisent un “slime” à 25°C.

LECTURE
Les colonies sont petites, blanc-grisâtre, plates ou bombées, lisses ou rugueuses.
La taille des colonies de lactobacilles et autres bactéries lactiques varie de 0,5 à 2,5 mm de diamètre, celle des entérocoques de 0,5 à 1 mm ; celle des bactéries non lactiques est supérieure à 2,5 mm après une incubation prolongée à température ambiante.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Lactobacillus acidophilus ATCC® 19992.
Contrôle négatif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923.

PRECAUTIONS
L. carnis ne pousse pas sur ce milieu.
Effectuer une coloration de Gram et la recherche de la catalase sur toutes les colonies isolées avant de poursuivre les tests d’identification.

BIBLIOGRAPHIE
1 Rogosa M., Mitchell J.A. and Wiseman R.F. (1951), J. Bact., 62, 132-133.
2 Reuter G. (1985), Int. J. Food Microbiol., 2, 55-68.
3 ISO/TC34/SC6/WG15(1984), Enumeration of Lactobacteriaceae in meat and meat products.
4 Sharpe, M. Elizabeth (1960), Lab. Practice, 9, 223-227.