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Milieux De Culture Déshydratés

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GLUCOSE TAMPONNE (BOUILLON)

CODE : CM0283

Bouillon glucosé tamponné pour la culture des germes exigeants.

COMPOSITION

(grammes/litre)

Tryptose 20,0
Glucose 2,0
Chlorure de sodium 5,0
Dihydrogénophosphate de sodium 2,5
pH 7,3 ± 0,2  

500 grammes permettent de préparer 16,9 litres de milieu.

PREPARATION
Dissoudre 29,5 g de poudre dans 1 litre d’eau distillée chaude et répartir. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.
Pour la culture des anaérobies, si le milieu reconstitué a été conservé avant d’être utilisé, le régénérer en plaçant les tubes dans un bain-marie bouillant pendant 15 minutes et le refroidir sans agiter avant ensemencement.

DESCRIPTION
Ce bouillon glucosé tamponné est à utiliser comme adjuvant dans les milieux de culture de tissus et pour la culture des germes exigeants. Ginsberg et coll. 1 ont maintenu en culture des cellules Hela pendant au moins 10 jours dans un mélange de bouillon glucosé tamponné à 15–25 %, de solution de conservation de Scheren à 67,5–77,5 % et de sérum de poulet à 7,5 %. Les cellules ont été multipliées par 3 à 5 durant cette période.
Milieu supplémenté
Le bouillon glucosé tamponné est recommandé pour la culture des streptocoques, pneumocoques, méningocoques et autres germes exigeants. Additionné de gélose et d’azoture de sodium, il est recommandé pour la culture des streptocoques pathogènes à partir des fromages et autres produits laitiers. 2,3
Additionné de gélose, il est également recommandé par l’APHA pour la recherche de Streptococcus pneumoniae lors de l’examen des prélèvements de gorge ou des hémocultures et comme milieu de croissance pour les pneumocoques avant le test de solubilité à la bile.
Il peut aussi être utilisé pour émulsionner les fromages avant isolement sur boîtes pour la recherche des Brucella sp.2
La faible proportion d’agar (0,1–0,2 %) nécessaire pour les méthodes décrites ci-dessus peut être ajoutée sans inconvénient au bouillon OXOID avant stérilisation, sous forme de comprimés de gélose OXOID CM0049 (1 comprimé pour 100 ml).

UTILISATION
Examen des prélèvements de gorge pour la recherche de S. pneumoniae 4:

1 Préparer le bouillon glucosé tamponné de la façon habituelle, mais ajouter une petite quantité de gélose en dissolvant 10 comprimés de gélose CM0049 par litre de bouillon avant autoclavage.
2 Mettre un prélèvement de gorge ou de crachat dans 3 ml de bouillon (gélosé) glucosé tamponné et incuber à 37°C pendant 2 heures. Si les
pneumocoques sont en nombre suffisant, faire directement le typage ou, mieux, utiliser la culture pour inoculer une souris.
Examen des fromages pour la recherche des streptocoques du groupe A par la méthode de Lancefield 2:
1 Chauffer 25 ml de bouillon (gélosé) glucosé tamponné (préparé comme ci-dessus) à 45°C.
2 Emulsionner 5 grammes de fromage dans le bouillon, en utilisant une tige en verre stérile. Répartir des dilutions de cette émulsion sur des boîtes de gélose tryptosée contenant 1,5 % d’agar et 0,04 % d’azoture de sodium.
Sinon, ajouter l’azoture de sodium en solution aqueuse stérile à l’émulsion pour donner une concentration finale de 2,5 %, incuber à 37°C pendant 12–14 heures, agiter, répartir en boîtes de gélose glucosée contenant 1,5 % d’agar et 0,04 % d’azoture de sodium.
L’azoture de sodium évite la croissance de la plupart des bactéries, excepté les streptocoques et quelques lactobacilles.
Hémoculture :
1 Ajouter 10 ml de sang à 150 ml de bouillon glucosé tamponné dans un flacon de 300 ml.
2 Incuber et faire des subcultures sur d’autres milieux selon la technique habituelle, en fonction des recherches à effectuer.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 4–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Streptococcus pneumoniae ATCC® 6303
Neisseria meningitidis ATCC® 13090

BIBLIOGRAPHIE
1 Ginsberg H.S. et coll. (1955) Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 89, 66-71.
2 American Public Health Association (1953) “Standard Methods for the Examination of Dairy Products” 10th ed., APHA Inc., New York, pp. 179,180,181.
3 Newman R.W. (1950) J. Milk Food Tech., 13, 226-233.
4 American Public Health Association (1953) “Diagnostic Procedures and Reagents” 4th ed., APHA Inc., New York, p.141

 
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