Part of Thermo Fisher Scientific
Organisms this product works with:
Other products used in the isolation of Streptococci:
CODE : CM0283
Bouillon glucosé tamponné pour la culture des germes exigeants.
COMPOSITION |
(grammes/litre) |
Tryptose | 20,0 |
Glucose | 2,0 |
Chlorure de sodium | 5,0 |
Dihydrogénophosphate de sodium | 2,5 |
pH 7,3 ± 0,2 |
500 grammes permettent de préparer 16,9 litres de milieu.
PREPARATION
Dissoudre 29,5 g de poudre dans 1 litre d’eau distillée chaude
et répartir. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.
Pour
la culture des anaérobies, si le milieu reconstitué a été conservé avant
d’être utilisé, le régénérer en plaçant
les tubes dans un bain-marie bouillant pendant 15 minutes et le refroidir sans
agiter avant ensemencement.
DESCRIPTION
Ce bouillon glucosé tamponné est à utiliser comme adjuvant
dans les milieux de culture de tissus et pour la culture des germes exigeants.
Ginsberg et coll. 1 ont maintenu en culture des cellules Hela pendant au moins
10 jours dans un mélange de bouillon glucosé tamponné à 15–25
%, de solution de conservation de Scheren à 67,5–77,5 % et de
sérum de poulet à 7,5 %. Les cellules ont été multipliées
par 3 à 5 durant cette période.
Milieu supplémenté
Le bouillon glucosé tamponné est recommandé pour la culture
des streptocoques, pneumocoques, méningocoques et autres germes exigeants.
Additionné de gélose et d’azoture de sodium, il est recommandé pour
la culture des streptocoques pathogènes à partir des fromages
et autres produits laitiers. 2,3
Additionné de gélose, il est également recommandé par
l’APHA pour la recherche de Streptococcus pneumoniae lors de l’examen
des prélèvements de gorge ou des hémocultures et comme
milieu de croissance pour les pneumocoques avant le test de solubilité à la
bile.
Il peut aussi être utilisé pour émulsionner les fromages
avant isolement sur boîtes pour la recherche des Brucella sp.2
La
faible proportion d’agar (0,1–0,2 %) nécessaire pour
les méthodes décrites ci-dessus peut être ajoutée
sans inconvénient au bouillon OXOID avant stérilisation, sous
forme de comprimés de gélose OXOID CM0049 (1 comprimé pour
100 ml).
UTILISATION
Examen des prélèvements de gorge
pour la recherche de S. pneumoniae 4:
1 Préparer le bouillon glucosé tamponné de la façon
habituelle, mais ajouter une petite quantité de gélose en dissolvant
10 comprimés de gélose CM0049 par litre de bouillon avant autoclavage.
2
Mettre un prélèvement de gorge ou de crachat dans 3 ml de
bouillon (gélosé) glucosé tamponné et incuber à 37°C
pendant 2 heures. Si les
pneumocoques sont en nombre suffisant, faire directement
le typage ou, mieux, utiliser la culture pour inoculer une souris.
Examen des
fromages pour la recherche des streptocoques du groupe A par la
méthode de Lancefield 2:
1 Chauffer 25 ml de bouillon
(gélosé) glucosé tamponné (préparé comme
ci-dessus) à 45°C.
2 Emulsionner 5 grammes de fromage dans le bouillon,
en utilisant une tige en verre stérile. Répartir des dilutions de cette émulsion
sur des boîtes de gélose tryptosée contenant 1,5 % d’agar
et 0,04 % d’azoture de sodium.
Sinon, ajouter l’azoture de sodium en solution aqueuse stérile à l’émulsion
pour donner une concentration finale de 2,5 %, incuber à 37°C pendant
12–14 heures, agiter, répartir en boîtes de gélose
glucosée contenant 1,5 % d’agar et 0,04 % d’azoture de sodium.
L’azoture de sodium évite la croissance de la plupart des bactéries,
excepté les streptocoques et quelques lactobacilles.
Hémoculture
:
1 Ajouter 10 ml de sang à 150 ml de bouillon glucosé tamponné dans
un flacon de 300 ml.
2 Incuber et faire des subcultures sur d’autres milieux selon la technique
habituelle, en fonction des recherches à effectuer.
CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 4–25°C jusqu’à la
date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.
CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Streptococcus pneumoniae ATCC® 6303
Neisseria meningitidis ATCC® 13090
BIBLIOGRAPHIE
1 Ginsberg H.S. et coll. (1955) Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 89, 66-71.
2
American Public Health Association (1953) “Standard Methods for the
Examination of Dairy Products” 10th ed., APHA Inc., New York, pp. 179,180,181.
3
Newman R.W. (1950) J. Milk Food Tech., 13, 226-233.
4 American Public Health
Association (1953) “Diagnostic Procedures and
Reagents” 4th ed., APHA Inc., New York, p.141