• Home |
• Contacts |
• Quality Standards |
• Instructions for Use |
• Careers

MRS (GELOSE) (De Man, Rogosa, Sharpe)

CODE : CM0361

Version solide du bouillon MRS pour la culture des bactéries lactiques.

500 grammes permettent de préparer 8 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 62 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Répartir et stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave.

DESCRIPTION
La formule du milieu MRS a été mise au point par De Man, Rogosa et Sharpe ¹ afin de remplacer un produit variable (jus de tomate) et de fournir en même temps un milieu propice au bon développement des lactobacilles en général, y compris des souches poussant faiblement sur les milieux existants.
Le milieu MRS est supérieur au milieu au jus de tomate de Briggs ² et au milieu au jus de tomate et à l’extrait de viande de De Man. Il permet une pousse plus abondante de toutes les souches de lactobacilles, et plus particulièrement des souches à développement lent et difficile comme L. brevis et L. fermenti.
La gélose et le bouillon MRS favorisent la pousse des bactéries lactiques. Elles sont Gram +, catalase et oxydase –, et exigeantes dans leurs besoins nutritifs. Leur croissance est considérablement améliorée en microaérophilie.
Généralement, les bactéries lactiques poussent tardivement en donnant de plus petites colonies que les autres microorganismes. Ces derniers peuvent envahir les milieux non sélectifs, surtout lors d’incubation de 2 à 4 jours.
Le pH du milieu peut servir de moyen de sélection puisque les Lactobacillus tolèrent un pH plus bas que les Streptococcus (pH 5,0–6,5), les Pediococcus et Leuconostoc qui se développent mieux dans cette zone de pH. Les inhibiteurs de la microflore associée sont : l’acétate de thallium, l’acétate de sodium, l’acide sorbique, l’acide acétique, le nitrate de sodium, le cycloheximide et la polymyxine. Ces substances peuvent être utilisées à des concentrations variables et associées entre elles, mais il faut trouver un compromis entre la sélectivité du milieu et la croissance du germe recherché.³
La gélose MRS contenant de l’acide sorbique a été décrite. ^3,4 C’est un milieu MRS avec un pH abaissé à 5,7 et contenant 0,14 % (pds/vol) d’acide sorbique (= 0,2 % (pds/vol) de sorbate de potassium).
Les lactobacilles sont microaérophiles et exigent généralement une technique en double couche pour la culture sur milieu solide en aérobiose. Les colonies obtenues en profondeur ou en surface peuvent être rugueuses ou lisses ; elles sont petites, opaques et plus ou moins blanches.

UTILISATION
Les produits à examiner sont mis à macérer ou dilués dans une solution de Ringer au quart ; les autres dilutions sont ensuite faites dans le bouillon MRS.
Mettre 1 ml d’échantillon dilué dans des boîtes de Pétri stériles, et ajouter la gélose MRS fondue à 45°C, puis mélanger soigneusement.
Après solidification, ajouter une nouvelle couche de gélose MRS, non ensemencée, à la surface.
Incuber les boîtes comme indiqué ci-dessous. Il est important d’avoir une atmosphère humide adéquate au-dessus de la gélose, afin qu’elle ne sèche pas lors de l’incubation, car ceci concentrerait les facteurs sélectifs en surface et rendrait le milieu inhibiteur.
Le CO2 stimule la croissance des germes et les boîtes doivent être incubées sous 5 % de CO2. Le milieu MRS est sélectif pour les Lactobacillus mais quelques Leuconostoc et Pediococcus peuvent s’y développer.

Méthode d’incubation :

Incubation en anaérobiose ou microaérophilie : confirmer les colonies suspectes par coloration de Gram ; les prélever en bouillon MRS. Ce bouillon a l’avantage de ne pas permettre aux autres germes, initialement inhibés sur gélose sélective, de se multiplier et ceci, à la différence du bouillon non sélectif. Incuber les tubes de bouillon à la même température et pendant le même temps que pour la gélose MRS, puis confirmer l’identification des germes isolés par examen microscopique et repiquage sur gélose MRS.

Le bouillon MRS peut être utilisé pour d’autres tests d’identification des Lactobacillus, tels que la température de croissance, la croissance en présence de 4 % de NaCl, en présence de 0,4 % de Teepol, etc…, comme indiqué par Sharpe, Fryer et Smith.⁵

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Lactobacillus acidophilus ATCC® 19992
Contrôle négatif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923.

BIBLIOGRAPHIE
1 Man J.C., de Rogosa M. and Sharpe, M. Elisabeth (1960), Appl. Bact., 23, 130-135.
2 Briggs M. (1953), J. Dairy Res., 20, 36-40.
3 Reuter G. (1985), Intern. J. Food Microbiol., 2, 55-68.
4 ISO/TC 34/SC 6/WG 15, No 3 and 5 (1984), Enumeration of Lactobacteriaceae in meat and meat products.
5 Sharpe, M. Elisabeth, Fryer T.F. and Smith D.G. (1966)“ Identification of the Lactic Acid Bacteria” in“ Identification Method for Microbiologists Part A” (Gibbs B.M. and Skinner F.A. eds.), London and New York, Academic Press, p. 65-79.