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LYSINE (GELOSE A LA)

CODE : CM0191

Milieu synthétique pour isoler et dénombrer les levures sauvages dans les brasseries. Les levures de culture sont supprimées sur ce milieu.

500 grammes permettent de préparer 7,5 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 6,6 g de poudre dans 100 ml d’eau distillée contenant 1,0 ml de lactate de potassium à 50 % (SR0037). Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète en agitant fréquemment pour éviter toute surchauffe. Refroidir à 50°C et ajouter 0,1 ml d’acide lactique à 10 % (SR0021) pour ajuster le pH à 5,0 ± 0,2. Répartir en boîtes de Pétri et sécher la surface du milieu à 37°C.

DESCRIPTION
Le milieu à la lysine est un milieu complexe, décrit initialement par Morris et Eddy¹, pour l’isolement et la numération des levures sauvages dans les levures de culture. Walters et Thiselton ² ont étudié 180 espèces de levures dans un milieu liquide synthétique contenant la lysine comme seule source d’azote. Ils ont trouvé qu’aucune souche normale de S. cerevisiae ou S. carlsbergensis n’utilise la lysine alors que beaucoup d’autres levures, y compris les levures sauvages l’utilisent. Ils ont conservé leurs souches sur gélose à l’extrait de malt pour les espèces de Brettanomyces. Plus tard, Morris et Eddy1 ont décrit un milieu solide à la lysine pour l’isolement et la numération des levures sauvages dans les levures de culture. La gélose à la lysine OXOID est préparée selon leur formule.

UTILISATION
Laver et centrifuger 3 fois avec de l’eau distillée l’échantillon de levure de culture. Prélever 0,2 ml de suspension contenant environ 107 cellules par ml et l’étaler à la surface d’une boîte de milieu à la lysine. Incuber à 25°C et examiner chaque jour pour rechercher une pousse. Compter le nombre de colonies et exprimer le degré de contamination en nombre de cellules de levure sauvage par million de cellules de l’inoculum de départ.
Le nombre de cellules dans l’inoculum est important car Morris et Eddy ont montré qu’un petit nombre de cellules (environ 100 à 1000) pousse d’une façon limitée sur ce milieu. Lorsque le nombre de levures de brasserie dépasse environ les 10 000 cellules, un comptage des colonies donne une mesure directe de la contamination par les levures sauvages.³

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Pichia fermentans ATCC® 10651
Contrôle négatif :
Saccharomyces (carlsbergensis) uvarum ATCC® 2700

PRECAUTIONS
La levure de culture peut pousser en formant un léger voile uniforme sur lequel se détachent les colonies de levure sauvage.

BIBLIOGRAPHIE
1 Morris E.O. and Eddy A.A. (1957), J. Inst. Brew. 63 (1), 34-35.
2 Walters L.S. and Thiselton M.R. (1953), J. Inst. Brew., 59, 401.
3 Fowell R.R. (1965), J. Appl. Bact., 28, 373-383.