Oxoid - Product Detail

NB : le supplément reconstitué est sensible à la lumière. Il est recommandé d’ajouter la solution immédiatement à la gélose de base. Si cette condition n’est pas respectée la solution peut devenir trouble.

PREPARATION
Verser 18,5 g de poudre dans 500 ml d’eau distillée. Porter doucement à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 10 minutes à 115°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C et ajouter stérilement le contenu d’un flacon de supplément (SR0073) reconstitué comme indiqué. Mélanger et répartir en boîtes de Pétri stériles. Le pH de ce milieu doit être de 7.0 ± 0.2 à 25°C.

DESCRIPTION
Ce milieu utilisant l’oxytétracycline comme agent sélectif est recommandé pour l’isolement et la numération des levures et moisissures dans les denrées alimentaires 1,2. Il est basé sur la formule développée par Mossel et coll.3 qui stipule que l’utilisation de cet antibiotique dans un milieu à pH neutre augmente le nombre de levures et moisissures obtenues à partir de denrées alimentaires variées, comparé avec les milieux basés sur un pH bas pour inhiber la croissance bactérienne. La numération des levures stressées donne un résultat supérieur sur les milieux dont la sélectivité 4 dépend d’antibiotiques à large spectre plutôt que d’un pH bas. Dans un travail préalable, Mossel 5 a montré que la gélose Extrait de levure-Glucose, était un milieu de base aussi favorable que la gélose “Mycophil”, recommandée plus tard par Sharf. 6 L’addition d’oxytétracycline a rendu la gélose Extrait de levure-Glucose plus sélective que la gélose “Mycophil”, en inhibant la croissance des lactobacilles dont la plupart se développent à pH acide.

Le choix du milieu le plus adapté à la numération des levures et moisissures est grandement fonction de la nature des denrées alimentaires à étudier et des microorganismes qu’elles sont susceptibles de contenir.7
La gélose OGYE reste bactériostatique lorsqu’on l’ensemence avec moins de 1 ml de dilution 10–1, d’aliments et qu’elle est incubée moins de 5 jours à 25°C, comme c’est la coutume en mycologie alimentaire2. Des aliments riches en protéines et une incubation à une température supérieure, aux alentours de 37°C, nécessaire à certains micro-organismes, entraineront une inactivation de l’oxytétracycline, permettant la croissance de bacilles Gram + et Gram –. Pour de telles applications, la gélose Rose bengale Chloramphénicol (CM0549) ou la gélose Dichloran-glycérol (CM0729) peuvent être utilisées.

UTILISATION
Réaliser des dilutions convenables de l’échantillon, et mettre 1 ml de chaque dilution dans 2 boîtes de Pétri. Ajouter environ 15 ml de milieu. Mélanger doucement. Incuber 5 jours à 22°C ± 2°C en recherchant la formation d’un mycélium au bout de 2 jours.
Compter le nombre de colonies sur les boîtes contenant entre 50 et 100 colonies après 5 jours ou, si le mycélium risque de gêner la lecture, effectuer la numération au bout de 2 jours. Le nombre de colonies obtenues pour chaque dilution doit être similaire sur les deux boîtes.
Calculer le nombre de levures ou moisissures pour 1 g ou 1 ml d’échantillon en multipliant ce nombre par le facteur de dilution.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–30°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE

Contrôle positif	résultats
Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404*	Colonies>10mm, mycélium blanc, spores noires
Saccharomyces cerevisiae ATCC® 9763*	Bonne croissance, colonies crèmes
Contrôle négatif	résultats
Escherichia coli ATCC® 25922*	inhibé

*ces souches sont disponibles en Cultiloops™

PRECAUTIONS
Les bactéries lactiques sont inhibées sur ce milieu.

BIBILIOGRAPHIE
1. Mossel D. A. A., Harrewijn G. A. and Elzebroek J. M. (1973) UNICEF.
2. Mossel D. A. A., Kleynen-Semmeling A. M. C., Vincentie H. M., Beerens H. and Catsaras M. (1970) J. Appl. Bact. 33. 454-457.
3. Mossel D. A. A., Visser M. and Mengerink W. H. J. (1962) Lab. Prac. II, 109-112.
4. Koburger J. A. and Mace F. E. (1967) Proc. W. Va. Acad. Sci. 39. 102-106.
5. Mossel D. A. A. (1951) Antonie Van Leeuwenhoek 17. 146.
6. Sharf J. M. (1960) Ann. Inst. Pasteur, Lille II. 117.
7. Mossel D. A. A., Vega Clara L. and Put H. M. C. (1975) J. Appl. Bact. 39. 15-22.
8. Dijkmann K.E., Koopmans M. and Mossel D.A.A. (1979) J. Appl. Bact. 47. ix.