Oxoid - Product Detail

COMPOSITION	(grammes/litre)
Peptone mycologique	5,0
Glucose	10,0
Phosphate dipotassique	1,0
Sulfate de magnésium	0,5
Rose-bengale	0,05
Agar	15,5
pH 7,2 ± 0,2 à 25°C

SUPPLEMENT CHLORAMPHENICOL
CODE : SR0078

COMPOSITION	SR0078E (1 flacon pour 500 ml de milieu)	SR0078H (1 flacon pour 2 L de milieu)	Par litre
Chloramphénicol	50 mg	200mg	100mg

PREPARATION
Verser 16,0 g de poudre dans 500 ml (32.0g/L) d’eau distillée et porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Reconstituer comme indiqué 1 flacon de supplément Chloramphénicol SR0078E pour 500 ml de milieu ou 1 flacon de supplément SR0078H pour 2L de milieu. Ajouter le supplément dans le milieu de base Rose-Bengale chloramphénicol (CM0549) bien mélanger. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C, bien mélanger et répartir en boîtes de Pétri stériles.

DESCRIPTION
La gélose Rose-bengale Chloramphénicol est un milieu sélectif pour la numération des levures et des moisissures dans une grande variété de produits alimentaires. Le milieu a un pH neutre et le chloramphénicol est utilisé comme agent sélectif pour inhiber la croissance des bactéries. De nombreuses études ont montré l’avantage d’utiliser des milieux à pH neutre contenant des antibiotiques.1,2
Le Rose-bengale est absorbé par les colonies de levures et de moisissures et, de ce fait, favorise la numération des petites colonies.3 Le Rose-bengale permet de contrôler la taille des colonies de moisissures telles que Neurospora et Rhizopus sp. L’envahissement des souches à croissance lente par des espèces luxuriantes est ainsi évité, ce qui favorise la numération.

Le choix du milieu le plus adapté pour les levures et moisissures est grandement dépendant de la nature des produits alimentaires à étudier et des organismes qu’ils sont susceptibles de contenir. 4
La gélose Rose-bengale Chloramphénicol est recommandée pour les aliments frais riches en protéines, dont la flore associée est composée essentiellement de bacilles Gram – ; il est à noter que le chloramphénicol tout seul peut ne pas être suffisant pour inhiber toute la flore associée. Le chloramphénicol étant stable, ce milieu peut également être utilisé lorsqu’une incubation aux alentours de 35°C est nécessaire.

UTILISATION
Verser, dans des boîtes de Pétri, 1 ml de différentes dilutions décimales de l’échantillon (utiliser 2 boîtes par dilution). Ajouter environ 15 ml de milieu refroidi à 50°C. Bien mélanger en maintenant la boîte sur une surface plane.
Après refroidissement, incuber 5 jours à 22°C ± 2°C. Compter les colonies sur les boîtes contenant environ 50 à 100 colonies et ramener à 1 g ou 1 ml d’échantillon, en multipliant le nombre de colonies par le facteur de dilution.
Pour plus d’information, consulter les références appropriées.5,6,7

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–30°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C, à l’obscurité.

ASPECT
Milieu déshydraté : rose, poudre fine
Milieu préparé : gélose rose

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Saccharomyces cerevisiae * ATCC® 9763 => bonne croissance ; colonies roses
Aspergillus brasiliensis* ATCC® 16404 => mycélium blanc, spores noires

Contrôle négatif :
Escherichia coli * ATCC® 25922 => pas de pousse
Enterococcus faecalis * ATCC® 29212 => pas de pousse
* ces souches sont disponibles en Cultiloops™

PRECAUTIONS
Il est essentiel de conserver les boîtes de milieu Rose-bengale Chloramphénicol à l’obscurité pour éviter la photo-oxydation de la poudre. Voir ci-dessus
Identifier les levures et les moisissures d’après la morphologie des colonies et l’examen microscopique. Les colonies des bactéries et des levures peuvent être confondues.

BIBLIOGRAPHIE
1. Mossel D. A. A., Visser M. and Mengerink W. H. J. (1962) Lab. Pract. 11. 109-112.
2. Koburger J. A. (1968) Bact. Proc. 13. A73.
3. Jarvis B. (1973) J. Appl. Bact. 36. 723-727.
4. Mossel D A. A., Vega C. L. and Put H. M. C. (1975) J. Appl. Bact. 39. 15-22.
5. American Public Health Association (1976) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA Inc. Washington DC.
6. American Public Health Association (1978) Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14th Edn. APHA Inc. Washington DC.
7. American Public Health Association (1981) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th Edn. APHA Inc. Washington DC.
8. Kramer C. L. and Pady S. M. (1961) Kansas Academy of Science Vol. 64 No. 2 1961. Inhibition of growth of Fungi on Rose-Bengal media by light.