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MAC CONKEY SANS CRISTAL VIOLET (GELOSE)

CODE : CM0007

Milieu différentiel pour l’isolement des coliformes et des germes entéropathogènes dans les eaux, les produits laitiers et les prélèvements biologiques.

500 grammes permettent de préparer 9,6 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 52 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Sécher la surface de la gélose avant ensemencement.

DESCRIPTION
La gélose de Mac Conkey est un milieu différentiel pour la recherche, l’isolement et la numération des coliformes et des germes entéropathogènes dans les eaux, les produits laitiers et les prélèvements biologiques.
Ce milieu correspond à celui recommandé par l’OMS¹, le “Department of Health ²” et par Windle Taylor ³ pour l’examen bactériologique de l’eau.
Bien qu’utilisé surtout pour les coliformes, ce milieu peut être également employé pour différencier d’autres bactéries d’origine intestinale (y compris les germes pathogènes), et convient à l’identification de Pasteurella sp.⁴

UTILISATION
Prélèvements pathologiques :
Etant donné qu’elle permet le développement des cocci Gram+ pathogènes (comme les staphylocoques et les entérocoques), ainsi que celui des entérobactéries, la gélose de Mac Conkey est particulièrement recommandée pour la culture des germes pathogènes pouvant être présents dans les échantillons tels que l’urine, les fèces et les prélèvements de plaie. Bien que sélectif, ce milieu ne supprime pas la flore associée comme le font d’autres milieux inhibiteurs (y compris les autres géloses de Mac Conkey). Il donne un certain nombre d’indications de diagnostic en plus de la tolérance à la bile, telles que la morphologie des colonies et la chromogénèse. La gélose de Mac Conkey doit être utilisée parallèlement à d’autres milieux sélectifs, tels que la gélose désoxycholate-citrate, la gélose de Wilson-Blair, la gélose au vert brillant, le bouillon bilié au vert brillant (2 %) et avec un milieu non sélectif comme la gélose au sang.
Examen de l’eau2,3:
Ce milieu peut être utilisé pour la numération directe des bactéries coli-aérogènes en utilisant la technique en boîte coulée avec des volumes connus d’eau à analyser. Il est cependant plus adapté pour différencier les germes produisant de l’acide et du gaz à 37°C en bouillon de Mac Conkey : tous les tubes de bouillon positif sont ensemencés sur gélose de Mac Conkey ; les boîtes sont incubées 24 heures à 37°C avant d’examiner les colonies caractéristiques (voir ci-dessous). Les bacilles non sporulés Gram – sont repiqués pour identification ultérieure.
La présence d’entérocoques dans des milieux au tellurite ou à l’azide peut être confirmée par repiquage sur gélose de Mac Conkey (voir ci-dessous pour la morphologie des colonies).
Différenciation des Yersinia et Pasteurella :
La gélose de Mac Conkey peut être utilisée pour différencier les espèces de Yersinia de celles de Pasteurella.4 Yersinia pestis, Y. pseudotuberculosis et Y. enterocolitica poussent sur gélose de Mac Conkey après 24 heures à 37°C ⁵, tandis que les espèces de Pasteurella (y compris P. multocida) ne s’y développent pas.
Germes pectinolytiques (Stewart)⁶ :
Stewart a utilisé la gélose de Mac Conkey comme milieu sélectif pour le diagnostic des germes pectinolytiques, afin d’isoler Erwinia sp. dans les prélèvements contenant d’autres entérobactéries. Ensemencer les boîtes de gélose de Mac Conkey au chlorure de calcium (5,2 g de CM0007 en poudre + 0,4 g de CaCl2 + 75 ml d’eau distillée) recouverte d’une couche de pectate-EDTA (0,1 % d’EDTA contenant 2 % de polypectate de sodium), puis incuber ces boîtes 48 heures à 25°C. Les Erwinia fermentant le lactose donnent des colonies rouges dans des creux peu profonds formés par la liquéfaction du pectate.

LECTURE (après 24 heures à 37°C)
L’aspect des colonies est le suivant :

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver les boîtes prêtes à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Enterococcus faecalis ATCC® 29212.
Staphylococcus aureus ATCC® 25923.

PRECAUTIONS
Les caractéristiques des colonies décrites ci-dessus ne donnent qu’une présomption sur l’identité des germes isolés. Il faut donc repiquer la culture et réaliser des tests pour confirmer l’identification.
Pour avoir une pigmentation accrue de Staphylococcus aureus, laisser les boîtes sur la paillasse à température ambiante pendant 12-18 heures.

BIBLIOGRAPHIE
1 World Health Organization (1963), International Standards for Drinking Water 2nd ed., WHO, Geneva.
2 Departments of the Environment, Health, Social Security and Public Health Laboratory Service (1982), The Bacteriological
Examination of Drinking Water Supplies, Report No 71, HMSO, London.
3 Windle Taylor E. (1958), ‘The examination of Waters and Water Supplies’ 7th ed., Churchill Ltd., London.
4 Hoogendijk J.L. (1962), Antonie van Leeuwenhoek J. Microbiol. Serol., 28, (3), 315-320.
5 Wilson G.S. and Miles A.A. (1964), ‘Topley and Wilson’s Principles of Bacteriology and Immunity’ 5th Ed., Edward
Arnold Ltd., London, vol. 2.
6 Stewart D.J. (1962), Nature, 195 (4845), 1023.