Oxoid - Product Detail

Code: DR0850

Test rapide d’agglutination au latex pour l’identification de Staphylococcus aureus par détection simultanée du clumping factor et de la protéine A.

COMPOSITION DU COFFRET
- Latex test
Particules de latex bleues sensibilisées par du fibrinogène et des IgG de lapin contenant des anticorps spécifiques dirigés contre les polysaccharides capsulaires de S. aureus.
- Latex de contrôle
Particules de latex bleues non sensibilisées
Cartes de réaction : DR0500
Des cartes de réaction jetables sont fournies dans chaque kit. Chaque carte permet d’effectuer 6 tests et peut être découpée et conservée pour les réactions ultérieures.

PRINCIPE
Le test traditionnel en tube détecte la coagulase extracellulaire (ou coagulase libre). L’agglutination sur carte permet la mise en évidence du clumping factor (ou coagulase liée). D’autres réactions telles que l’hémagglutination passive (Staphylase OXOID) ou la recherche de DNase peuvent aussi être utilisées.
Environ 97 % des souches humaines de S. aureus possèdent à la fois le clumping factor et la staphylocoagulase extracellulaire. 95 % des souches humaines élaborent aussi la protéine Aqui présente la propriété de se lier au fragment Fc des immunoglobulines G (IgG)².
Le Staphytect Plus est constitué de particules de latex bleues, sensibilisées par du fibrinogène et des IgG contenant des anticorps spécifiques dirigés contre les polysaccharides capsulaires de S. aureus. Lorsque l’on met en présence les colonies de staphylocoques portant le clumping factor et/ou la protéine Aet le latex, il apparaît une agglutination due à la réaction fibrinogène-clumping factor et/ou protéine A-IgG, les IgG spécifiques et les polysaccharides capsulaires.
Cette agglutination se produit essentiellement en présence de S. aureus. Néanmoins, d’autres espèces telles que S. hyicus et S. intermedius peuvent aussi être coagulase positive. Lorsqu’aucune agglutination ne se produit, la réaction doit être considérée comme négative. S. epidermidis ne possède ni protéine A, ni clumping factor.

MODE D’EMPLOI
A. Préparation et recueil des échantillons
Pour les détails concernant le recueil et le traitement des échantillons , un manuel standard de bactériologie doit être consulté ³ .
Les colonies gram positif et catalase positive peuvent être testées à partir des milieux suivants :
Gélose au sang
Gélose nutritive
Gélose tryptone soja Gélose tryptone soja +5% de sang
Gélose Mannitol salée
Gélose Columbia Gélose Columbia ANC
Mueller Hinton +5% de sang
Baird Parker
CLED
Gélose Iso Sensitest
Gélose Iso Sensitest + 5% de sang
Oxacilline Resistant Screening Agar (ORSA)
L’utilisation de cultures fraîches est recommandé (après 18 à 36 heures d’incubation). Les colonies ont tendance à agglutiner si la durée d’incubation dépasse 36 heures.
B. Mode opératoire
Méthode standard
1. Ramener le latex à température ambiante. S’assurer que le latex a été remis en suspension par agitation et expulser le latex du compte goutte.
2. Ajouter une goutte de latex dans le cercle de réaction prévu à cet effet, et une goutte de latex de contrôle dans l’autre cercle.
3. Avec une oese stérile, prélever 5 colonies de taille moyenne (équivalent 2-3 mm) et les émulsionner doucement avec le latex de contrôle. Recouvrir l’ensemble de la zone. Eliminer l’oese de façon appropriée..
4. En utilisant une autre oese, procéder de la même façon avec le latex test.
5. Imprimer à la carte un mouvement de rotation douce pendant 20 secondes environ et observer l’agglutination sous une lumière normale. Ne pas utiliser de loupe pour la lecture.
6. Une fois le test terminé, éliminer les cartes de réaction dans une solution désinfectante.
Méthode pour les colonies à partir de l’Oxacilline Resistant Screening Agar (ORSA)
1. Idem méthode standard
2. Utiliser une oese stérile pour prélever l’équivalent de 5 colonies suspectes de taille moyenne (équivalent 2-3 mm de diamètre) à partir d’une boîte et les déposer sur la zone de contrôle. A l’aide de l’oese, bien écraser les colonies pour les dissocier sous forme d’un film fin.
3. Rajouter une goutte de latex de contrôle directement sur le film et mélanger immédiatement.
4. Procéder de la même façon pour le latex test.
5-6-Procéder comme pour la méthode standard.
C. Lecture et interprétation des résultats
Un résultat est considéré comme positif s’il y a agglutination en moins de 20 secondes (présence de S. aureus).
En cas de réaction négative, le latex demeure uniformément bleu (absence de S. aureus).
Ne pas tenir compte d’une agglutination au-delà de 20 secondes. Si le contrôle négatif présente une agglutination, la réaction est ininterprétable.
La réaction peut être filamenteuse ou granuleuse. Ceci est dû à la nature de l’échantillon et peut être interprété de la façon suivante :
- réaction négative si le fond reste bleu avec le latex test et le latex de contrôle.
- réaction positive si l’éclaircissement du fond est plus important avec le latex test qu’avec le latex de contrôle.

BIBLIOGRAPHIE
1. Essers L. and Radebold K. (1980) J. Clin. Microbiol. 12, 641-643.
2. Taussig M.J. (1984) Processes in Pathology and Microbiology, 2nd Ed., 520-530.
3. Kloos W.E. and Smith P.B. (1980) Manual of Clinical Microbiology, 3rd Ed., 83-87.