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SUPPLEMENT RPF

CODE : SR0122

Supplément sélectif et de diagnostic pour l’isolement, la numération et la confirmation de Staphylococcus aureus à partir de produits alimentaires et d’autres échantillons.

Chaque flacon permet de supplémenter 100 ml de milieu.

PREPARATION
Reconstituer un flacon stérilement avec 10 ml d’eau distillée stérile. Agiter doucement par retournement. Eviter la formation de mousse. La dissolution n’est pas obtenue immédiatement. Laisser reposer pendant 5-10 minutes jusqu’à dissolution complète. Ajouter stérilement le contenu du flacon à 90 ml de gélose de base Baird-Parker refroidie à 48°C. Bien mélanger et répartir.

DESCRIPTION
La gélose RPF est basée sur la formule de Beckers et coll. ¹. Ce milieu est une modification du milieu de Baird-Parker recommandée pour l’isolement sélectif, la numération et la confirmation de Staphylococcus aureus à partir de produits alimentaires ou d’autres échantillons ².
La gélose RPF est constituée par la gélose de base de Baird-Parker spécialement formulée pour la culture des germes stressés ³. Ce milieu diffère de celui de Baird-Parker par le fibrinogène, le plasma de lapin et l’inhibiteur de trypsine qui remplacent l’émulsion de jaunes d’oeufs. Le fibrinogène de boeuf améliore la réaction de la coagulase ⁴. Le plasma de lapin est plus sélectif vis-à-vis de l’activité de la coagulase que d’autres sources de plasma1. L’inhibiteur de trypsine évite la fibrinolyse.
Le supplément RPF a été modifié par rapport à la formule originale : le contenu en tellurite de potassium a été réduit quatre fois, c’est-à-dire 0,0025 % au lieu de 0,01 % (pds/vol). Cette réduction était nécessaire car les laboratoires OXOID avaient trouvé que certaines souches de Staphylococcus aureus étaient sensibles au tellurite de potassium quand il était utilisé à 0,01 % dans la gélose RPF ⁵. Cette gélose RPF modifiée donne une pousse et une sélectivité comparables à celles obtenues sur le milieu de Baird-Parker. D’autres laboratoires ont également confirmé l’amélioration de sa productivité ^6,7. La réduction de la concentration en tellurite de potassium dans la gélose RPF a pour résultat la formation de colonies de Staphylococcus aureus blanches, grises ou noires, entourées d’un halo de précipitation opaque, dû à la réaction de la coagulase.

UTILISATION
Méthode d’ensemencement en surface :
1 Préparer la gélose RPF comme indiqué.
2 Mettre l’échantillon dans un stomacher ou autre homogénéiseur avec la quantité de diluant recommandée.
3 Ensemencer les boîtes avec 0,1 ml des échantillons ou avec des dilutions décimales de ceux-ci.
4 Incuber à 37°C et examiner après 24 à 48 heures.
5 Compter toutes les colonies présentant un halo opaque de précipitation.
6 Reporter au nombre de staphylocoques coagulase + par gramme d’aliment.
Méthode en boîte coulée :
1 Préparer la gélose RPF comme indiqué et la maintenir à 48°C.
2 Mettre l’échantillon de produit alimentaire dans un stomacher ou autre homogénéiseur avec la quantité de diluant recommandée.
3 Ajouter 1 ml de l’échantillon préparé (après mise en suspension ou dilution décimale) dans chacune des boîtes de Pétri stériles.
4 Ajouter stérilement 20 ml de gélose RPF stérile et mélanger.
5 Incuber à 37°C et examiner après 24 à 48 heures.
6 Compter toutes les colonies présentant un halo opaque de précipitation.
7 Reporter au nombre de staphylocoques coagulase + par gramme d’aliment.

PRECAUTIONS
Les colonies de certains microorganismes contaminants poussant à proximité des colonies coagulase + peuvent supprimer partiellement le halo de la réaction coagulase.

CONSERVATION
Conserver le supplément entre –10°C et –20°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette.

BIBLIOGRAPHIE
1 Beckers H.J., van Leusden F.M., Hogeboom W.M. and Delfgon-van Asch E.H.M. (1980) (English summary) De Ware(n)-Chemicals 10, 125–130.
2 Beckers H.J., van Leusden F.M., Bindshedler O. and Guerraz D. (1984) Can. J. Microbiol. 30, 470–174.
3 Baird-Parker A.C. (1962) J. Appl. Bacteriol. 25, 12–19.
4 Hauschild A.H.W., Park C.E. and Hilsheimer R. (1979) Can. J. Microbiol. 25, 1052–1057.
5 Sawhney D. (1986) J. Appl. Bact. 61, 149–155.
6 Beckers H.J. (1985) Personal Communication.
7 Van Schothorst M. (1985) Personal Communication.