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CODE : CM0641

Milieu sélectif pour l’isolement de Staphylococcus aureus à partir d’échantillons cliniques ou de produits alimentaires.

500 grammes permettent de préparer 8,2 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 61 g de poudre dans un litre d’eau distillée et porter à ébullition doucement jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir à 50°C et ajouter 5,7 ml de solution de tellurite de potassium à 3,5 % SR0030 (équivalent à 20 ml de tellurite de potassium à 1 %).

DESCRIPTION
La gélose Vogel-Johnson, par sa sélectivité et la présence de rouge de phénol indiquant la fermentation du mannitol, permet la détection de Staphylococcus aureus dans les produits alimentaires très contaminés et les échantillons cliniques. Sa formule correspond aux spécifications de la Pharmacopée Américaine.¹
Vogel et Johnson² ont modifié la composition de la gélose Tellurite Glycine de Zebovitz et coll.³ en portant à 1 % (pds/vol) la concentration de mannitol et en ajoutant le rouge de phénol comme indicateur du pH. L’apparition de zones jaunes entourant les colonies indique clairement le renforcement de la réaction de fermentation dû à l’augmentation de la quantité de mannitol.
Staphylococcus aureus réduit le tellurite en tellurium métallique qui donne des colonies noires.
Durant les 24 premières heures d’incubation, le tellurite, le chlorure de lithium et la haute concentration en glycine inhibent presque complètement les microorganismes contaminants. De fait, tous les microorganismes qui poussent pendant ce laps de temps, sont coagulase +.
Les microorganismes qui poussent sous forme de colonies noires entourées d’une zone jaune après une incubation de 24 heures à 35–37°C sont considérés comme étant des Staphylococcus aureus.
Une incubation prolongée peut permettre la pousse de colonies noires coagulase –, or si ces microorganismes fermentent également le mannitol, on peut les identifier faussement d’après leur apparence comme des Staphylococcus aureus. Dans ce cas, faire des tests d’identification supplémentaires avant de conclure que le microorganisme est un Staphylococcus aureus.

UTILISATION
Echantillons alimentaires :
1 Sécher la surface des boîtes.
2 Avec une pipette en rateau, étaler de 0,1 à 1,0 ml de l’échantillon dilué dans de l’eau peptonée à 0,1 % sur la surface de chaque boîte bien séchée.
3 Incuber à 35–37°C et examiner après 24 et 48 heures.
Echantillons cliniques :
1 Sécher la surface des boîtes.
2 Ensemencer directement avec l’échantillon.
3 Incuber à 35–37°C et examiner après 24 et 48 heures.

LECTURE
Staphylococcus aureus apparaît sous forme de colonies noires, convexes, brillantes, entourées d’une zone jaune.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922

PRECAUTIONS
On doit confirmer par des tests complémentaires la présomption de Staphylococcus aureus.
Ne pas chauffer le milieu après l’addition du tellurite de potassium.

BIBLIOGRAPHIE
1 United States Pharmacopeia XXI (1985) Microbial Limit Tests. Rockville. Md.
2 Vogel R.A. and Johnson M.J. (1961) Pub. Hlth. Lab., 18, 131.
3 Zebovitz E., Evans J.B. and Niven C.F. (1955) J. Bact., 70, 687.