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TEST AU LATEX POUR LA DETECTION DES PROTEINES LIANT LA PENICILLINE (PLP2’)

CODE : DR0900

Ce kit détecte les PLP2’ sur les isolats de Staphylococcus aureus pour l’identification des Staphylococcus aureus résistants à la méticilline (MRSA).

COMPOSITION DU COFFRET
Coffret de 50 tests
DR0901 test au latex sensibilisé par un anticorps monoclonal dirigé contre les PLP2’
DR0902 latex de contrôle sensibilisé par un anticorps monoclonal de la même sousclasse d’IgG, mais dirigé contre une protéine humaine ne montrant aucune réactivité avec les protéines de S. aureus
DR0903 réactif d’extraction 1
DR0904 réactif d’extraction 2
Cartes test
Sticks

PRINCIPE
Staphylococcus aureus est un germe opportuniste. Pendant de nombreuses années, les isoxazolylpénicillines (méticilline, cloxacilline, flucloxacilline, etc.) ont été efficaces dans le traitement de ces germes, mais l’émergence de souches résistantes à ces composants pose de plus en plus de problèmes. Ces souches de S. aureus méti-résistantes (MRSA) sont particulièrement importantes puisque certaines souches épidermiques disséminent facilement et colonisent les patients. Leur identification précise est donc importante.
Les méthodes conventionnelles d’antibiogramme pour l’identification des MRSA ne sont pas toujours fiables car l’expression phénotypique de la résistance in vivo est variable. La détermination précise de la résistance à la méticilline est sujette aux variations d’inoculum, température et temps d’incubation, pH du milieu, concentration en sel, etc. Bien que certains laboratoires de référence se tournent maintenant vers la PCR qui détecte le gène codant pour la résistance à la méticilline (mecA)¹, il est plus simple en routine de détecter le produit de ce gène, c’est-à-dire les protéines liant la pénicilline (PLP2’) ^2,3,4.
Ce test est un test rapide d’agglutination au latex qui détecte les PLP2’ dans un but diagnostic et épidémiologique ⁵.
Les particules de latex sont sensibilisées par un anticorps monoclonal dirigé contre les PLP2’ et qui réagit spécifiquement avec les MRSA, donnant une agglutination bien visible.

MODE D’EMPLOI
A. Recueil et préparation des échantillons
Le test doit être réalisé à partir de colonies isolées sur l’un des milieux gélosés suivants : gélose au sang, Columbia au sang, Columbia ANC, Mueller Hinton + 5 % de sang, Tryptone soja + 5 % de sang, ORSA.
Il est recommandé d’utiliser des cultures fraîches (18-24 heures).
B. Mode opératoire
Extraction des PLP2’
1. Ajouter 4 gouttes de réactif d’extraction 1 dans un microtube.
2. Prélever suffisamment de colonies pour remplir la boucle d’une oese (5 µl).
3. Placer le tube dans un bain-marie bouillant ou dans un bloc chauffant (à 100°C) pendant 3 minutes.
4. Sortir le tube et le laisser revenir à température ambiante.
5. Ajouter une goutte de réactif d’extraction 2 dans le tube et bien mélanger.
6. Centrifuger à 1 500 G pendant 5 minutes (c’est-àdire 3 000 RPM avec un rayon de rotation de 15 cm ou 4 500 RPM avec un rayon de rotation de 4,5 cm). Utiliser le surnageant pour le test.
C. Procédure d’agglutination
1. Pour chaque surnageant à tester, étiqueter un cercle de la carte de réaction pour le latex test et un autre cercle pour le latex de contrôle.
2. Déposer 50 µl du surnageant sur le cercle test et ajouter une goutte de latex test. Mélanger avec un stick.
3. De même, déposer 50 µl de surnageant sur le cercle de contrôle et ajouter une goutte de latex de contrôle. Bien mélanger avec un stick.
4. Imprimer un mouvement de rotation à la carte pendant 3 minutes et regarder l’agglutination dans des conditions de lumière normale.
5. Eliminer la carte de réaction dans un désinfectant.
D. Lecture et interprétation des résultats