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STAPHYLOCOQUES (MILIEU N°110 POUR)

CODE : CM0145

Ce milieu sélectif permet l’isolement et l’identification des staphylocoques pathogènes par la tolérance au sel, la pigmentation, la fermentation du mannitol et la liquéfaction de la gélatine.

500 grammes permettent de préparer 3,3 litres de milieu.

PREPARATION
Verser 149,5 g de poudre dans un litre d’eau distillée. Porter à ébullition jusqu’à dissolution complète. Stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Agiter pour disperser le précipité avant de répartir.

DESCRIPTION
Le milieu n°110 pour staphylocoques est un milieu sélectif qui permet l’isolement et l’identification des staphylocoques pathogènes (Chapman¹) par la tolérance au sel, la pigmentation, la fermentation du mannitol et la liquéfaction de la gélatine. Les staphylocoques pathogènes (coagulase +) sont capables de pousser sur un milieu hyper-salé au mannitol en formant des colonies orangées qui donnent une réaction positive pour la production d’acide et la liquéfaction de la gélatine.
D’après Stone², la présence de gélatinase est le signe d’une souche responsable d’intoxications alimentaires, mais Chapman et coll.³ ont signalé que les staphylocoques responsables d’intoxications alimentaires devaient aussi produire une pigmentation orange, être hémolytiques, coagulase + et fermenter le mannitol. Chapman⁴ a montré qu’une incubation à 30°C donnait une pigmentation plus intense et n’interférait pas avec la réaction de Stone ou avec la fermentation du mannitol (ces 2 dernières réactions étant aussi intenses qu’à 37°C).
Grâce à l’addition d’azoture de sodium, Smuckler et Appleman ⁵ ont rendu le milieu n°110 pour staphylocoques sélectif pour isoler les staphylocoques coagulase + dans des tourtes à la viande contenant un grand nombre de Bacillus.
Ce milieu correspond aux spécifications ⁸ de l’APHA ⁶et de l’AOAC ⁷. Carter ⁹ a ajouté du jaune d’oeuf (5 % vol/vol de SR0047) afin de visualiser les réactions caractéristiques des staphylocoques sur le jaune d’oeuf.

UTILISATION
Ensemencer par stries ou par étalement le milieu n°110 pour staphylocoques et incuber 43 heures à 37°C ou 48 heures à 30°C. Les colonies pigmentées sont orange intense, tandis que les non pigmentées sont blanches.
La fermentation du mannitol est plus facilement mise en évidence par l’adjonction d’une goutte de bleu de bromothymol à 0,04 % sur les colonies isolées ; une coloration jaune indique une production d’acide.
L’hydrolyse de la gélatine est révélée par l’addition sur une colonie isolée d’une goutte d’une solution aqueuse saturée de sulfate d’ammonium ou plutôt d’une solution aqueuse à 20 % d’acide sulfosalicylique (réaction de Stone). Une réaction de Stone positive se traduit par l’apparition, en 10 minutes, d’une zone claire autour des colonies.
Repiquer la culture en bouillon nutritif n°2 (CM0067) ou sur gélose au sang (CM0055) avant de rechercher la coagulase.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu prêt à l’emploi à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923
Contrôle négatif :
Escherichia coli ATCC® 25922

PRECAUTIONS
Enteroccus faecalis peut pousser sur ce milieu en formant de très petites colonies fermentant faiblement le mannitol.
La forte concentration en sel de ce milieu peut interférer avec la réaction de coagulase. Il faut toujours repiquer la culture sur milieu non inhibiteur avant de faire cette recherche.

BIBLIOGRAPHIE
1 Chapman G.H. (1946), J. Bact., 51, 409-410.
2 Stone R.V. (1935), Proc. Soc. Exper. Biol. & Med., 33, 185-187.
3 Chapman G.H., Lieb C.W. and Cumco L.G. (1937), Food Research 2, 349-367.
4 Chapman G.H. (1947), J. Bact., 53, 365-366.
5 Smuckler S.A. and Appleman M.D. (1964), Appl. Microbiol.,12, 335-359.
6 American Public Health Association (1976) Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods,
APHA Inc. Washington DC.
7 Association of Official Analytical Chemists (1978), Bacteriological Analytical Manual, 5th Edn. AOAC Washington DC.
8 Chapman G.H. (1952), J. Bact., 63, 147-150.
9 Carter C.H. (1960), J. Bact., 79, 753-756.