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CODE : CM0523

Bouillon d’enrichissement anaérobie pour Staphylococcus aureus.

500 grammes permettent de préparer 9,2 litres de milieu.

PREPARATION
Mettre 54,2 g de poudre dans un litre d’eau distillée et chauffer doucement jusqu’à dissolution. Répartir 19 ml par tube et stériliser 15 minutes à 121°C à l’autoclave. Refroidir rapidement et ajouter stérilement 0,3 ml de solution de tellurite de potassium à 3,5 % (SR0030).
L’addition de tellurite de potassium à 3,5 % est nécessaire pour la numération des bactéries dans les oeufs en poudre et les produits laitiers servant au sevrage. Pour la viande et les produits carnés, il est nécessaire de diluer le tellurite de potassium (SR0030) au 1/10 dans de l’eau distillée stérile.

DESCRIPTION
Le bouillon de Giolitti-Cantoni OXOID, milieu d’enrichissement tellurite-mannitol-glycocolle, est basé sur la formule de Giolitti et Cantoni.¹ Il est utilisé pour l’enrichissement de Staphylococcus aureus dans les produits alimentaires. Le mannitol et le pyruvate de sodium sont des facteurs de croissance pour les staphylocoques, et permettent la détection de ce germe quand il est présent en petit nombre seulement.²
Les bacilles Gram – fermentant le lactose sont inhibés par le chlorure de lithium et les bacilles Gram + par le tellurite de potassium et le glycocolle.
L’anaérobiose, créée en recouvrant le milieu de 2 cm de paraffine stérile, inhibe le développement des microcoques.
Le bouillon de Giolitti-Cantoni est recommandé pour la recherche de Staphylococcus aureus dans les laits en poudre pour bébés et autres aliments de sevrage dans lesquels ce germe doit être absent dans un gramme de produit.⁴
Ce milieu convient à l’examen de la viande et des produits carnés ⁵ en réduisant la concentration de tellurite de potassium à 0,35 % et en diminuant le poids de l’échantillon à 0,1–0,01 g.

UTILISATION
Ensemencer le milieu dès qu’il est assez refroidi après autoclavage. Si le milieu n’est pas utilisé tout de suite après sa préparation, le régénérer par immersion dans un bain de vapeur pendant 20 minutes.
Ensemencer 1 g de l’échantillon, ainsi que 1 ml d’une série de dilutions décimales, dans 19 ml de bouillon de Giolitti-Cantoni. Utiliser 2 tubes pour chaque dilution et pour l’échantillon non dilué. Ceci augmente les chances d’isolement de Staphylococcus aureus quand il est en petit nombre dans l’échantillon.
Le milieu est recouvert avec 2 cm de paraffine fondue stérile (chauffée à 42–44°C) et incubé à 37°C pendant 48 heures, puis examiné quotidiennement.
En l’absence de Staphylococcus aureus, on n’observe pas de noircissement du milieu. Si un noircissement apparaît au fond des tubes ou dans tout le milieu, ensemencer le bouillon par stries sur un milieu d’isolement pour staphylocoques, comme le milieu de Baird Parker ⁶(CM0275B) , et incuber 24 à 48 heures à 37°C. Un résultat positif donne des colonies noires avec une étroite bordure blanche, et entourées d’un halo clair.

CONSERVATION
Conserver le milieu déshydraté à 10–25°C jusqu’à la date de péremption indiquée sur le flacon.
Conserver le milieu préparé à 2–8°C.

CONTROLE DE QUALITE
Contrôle positif :
Staphylococcus aureus ATCC® 25923.
Contrôle négatif :
Staphylococcus epidermidis ATCC® 12228.

BIBLIOGRAPHIE
1 Giolitti C. and Cantoni C. (1966) J. Appl. Bact., 29, 395.
2 Baird-Parker A.C. (1962) J. Appl. Bact., 25, 12.
3 Lambin S. and German A. (1961) ‘Precis de microbiologie’ p. 63, Paris Masson.
4 Mossel D.A.A., Harrewijn G.A. and Elzebroek J.M. (1973) UNICEF.
5 ISO/DIS 5551 (1177) Part 2.
6 De Waart J., Mossel D.A.A., Ten Broeke R. and Van de Moosdijk (1968) A.J. Appl. Bact., 31, 276